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產(chǎn)品名稱:α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)測試盒規(guī)格
規(guī)格 : 50管/48樣、100管/96樣
測試方法:微量法、紫外分光光度法
貨號:YS-01S6446
測定意義
α-KGDH(EC 1.2.4.2)廣泛存在于動物、植物微生物和培養(yǎng)細胞的線粒體中,是三羧酸循環(huán)調(diào)控關(guān)鍵酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脫羧生成琥珀酰輔酶。
測定原理
α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和輔酶生成琥珀酰輔酶、 二氧化碳和 NADH,NADH在340 nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。
需自備的儀器和用品
紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
【友情提示】:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。避免給您帶來不必要的損失,請仔細閱讀購買說明!
樣品制備:
1). 直接或稀釋使用清亮無色中性液體樣品,體積可達2.000ml。
2). 過濾混濁溶液。
3). 除去樣品中的CO 2 。
4 ). 加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0。
5 ). 調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0,孵育約15分鐘。
6 ). 用空白樣品做對照測定有色樣品(如有必要調(diào)整PH值至8.0)。
7 ). 用PVPP( 聚乙烯吡咯烷酮)或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品。
8 ). 壓碎、攪勻固體或半固體樣品,用水溶解提取。
9 ). 用Carrez試劑將含有蛋白質(zhì)的樣品去蛋白。
10).含脂肪的樣品用熱水提取。
操作步驟:
實驗開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
特點:
(1)應(yīng)用廣泛
由于各種各樣的無機物和有機物在紫外可見區(qū)都有吸收,因此均可借此法加以測定。到目前為止,幾乎化學(xué)元素周期表上的所有元素(除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外)均可采用此法。
(2)靈敏度高
由于相應(yīng)學(xué)科的發(fā)展,使新的有機顯色劑的合成和研究取得可喜的進展,從而對元素測定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡(luò)合物和各種表面活性劑的應(yīng)用研究,使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來的幾萬提高到幾十萬。相對于其它痕量分析方法而言,光度法的精密度和準確度一致*是比較高的。不但在實際工作中光度法被廣泛采用,在標準參考物質(zhì)的研制中,它更受重視,很多光度分析法已制定成為標準方法。
(3)選擇性好
目前已有些元素只要利用控制適當?shù)娘@色條件就可直接進行光度法測定,如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測定,已有比較滿意的方法了。
(4)準確度高
對于一般的分光光度法來說,其濃度測量的相對誤差在1-3%范圍內(nèi),如采用示差分光度法測量,則誤差往往可減少到千分之幾。
(5)適用濃度范圍廣
可從常量(1-50%)(尤其是使用示差法)到痕量(10-6-10-8%)(經(jīng)預(yù)富集后)。
(6)分析成本低、操作簡便、快速
Anti-phospho-c-Raf (Ser338) /FITC 熒光素標記磷酸化原癌基因c-Raf抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Bovine IgG 兔抗IgG (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格: 1mg
GDNF家族受體α-1抗體 Anti-GFRα-1/GDNF 0.1ml
Rabbit Anti-chicken IgG/HRP 辣根過氧化物酶標記的兔抗雞IgG 0.1ml
FAR2 英文名稱: 脂肪酰A還原酶2抗體 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-Smad1(Ser206) 磷酸化細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子Smad-1抗體 規(guī)格 0.1ml
Rabbit Anti-Bovine IgG 兔抗IgG (親和層析純化)Multi-class antibodies規(guī)格: 1mg
PHD3 (Egln3; HIF-prolyl hydroxylase 3) 脯氨酸羥化酶(多肽)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
Anti-B7-DC/CD273 程序性死亡配體2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
Rhesus antibody Rh phospho-ADRB2(Ser346) 磷酸化腎上腺素能受體β2抗體 規(guī)格 0.1ml
Mast Cell Tryptase 濃縮液 0.1ml 進口分裝
USE1 英文名稱: 囊泡轉(zhuǎn)運蛋白Use1抗體 0.2ml
CHODL 英文名稱: 軟骨凝集蛋白CHODL抗體 0.1ml
Anti-B7-DC/CD273 程序性死亡配體2抗體Multi-class antibodies規(guī)格: 0.1ml
SKP1 英文名稱: S期激酶相關(guān)蛋白1抗體 0.2ml
alpha Elastin 英文名稱: α彈性蛋白抗體 0.1ml
轉(zhuǎn)移生長因子–β受體1抗體 Anti-TGF-βR1/ALK 0.1ml
Anti-TM/FITC 熒光素標記血栓調(diào)節(jié)蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格: 0.2ml
Rhesus antibody Rh Phospho-LAT (Tyr191) 磷酸化T細胞活化連接蛋白抗體 規(guī)格 0.1ml
OPN 骨橋蛋白(多肽抗原)Multi-class antibodies規(guī)格: 0.5mg
α酮戊二酸脫氫酶(α-KGDH)測試盒規(guī)格乙?;阴1?/span>(>99%,BR)五味子酯甲CY5蛋白標記試劑盒
溴化乙酰膽(>98%,BR)五味子乙SULFORHODAMINE蛋白標記試劑盒
酮肟(>98%,BR)煙??贵w/蛋白HRP標記制備試劑盒
化乙酰膽(>98%,BR)西紅花苷抗體/蛋白AP標記制備試劑盒
酸性藍29(>50%,Ind Grade)西紅花苷I抗體/蛋白生物素標記制備試劑盒
酸性藍40(>50%,BS)西紅花苷II抗體蛋白質(zhì)A標記制備試劑盒
酸性品紅6B(>50%,BS)桑色素病HRP標記制備試劑盒
吖啶鹽酸鹽(>98%,BS)D-(-)-奎寧酸蛋白電泳2倍樣品處理液