耶氏肺孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

實驗過程：
一、耶氏肺孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準備
1. DNA模板
2．產品僅用于科研對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μl
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
     加ddH2O至               50 μl
     視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
參數(shù)規(guī)格：
產品名稱：耶氏肺孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒
英文名稱：Pneumocystis jirovecii
產品規(guī)格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
產品特點：本產品就是根據(jù)保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏熒光定量 PCR 產品。
運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據(jù)機型決定，具體見使用方法）。
本產品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

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產品及特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)鮑皰疹樣病毒探針法熒光定量保守序列設計的專一性引物，與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
以下是公司正在熱銷的產品：
Mogroside Ⅴ胰島細胞抗體檢測試劑盒20mg

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載脂蛋白A2(APOA2)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)重組人 Neuropilin 2 / NRP2 蛋白 (Fc 標簽)*250(g)

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四基羅丹明5酰5mg

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cerbB2蛋白  cerbB2蛋白（抗原）進口、分裝布魯氏菌抗體檢測試盒5gHuman/人Elisa試盒49805303
耶氏肺孢子蟲探針法熒光定量PCR試劑盒膽紅素 CAS號： 635654 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

根皮素 CAS號： 60822 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

蟾毒靈 CAS號： 465214 不是68403268 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

白術內III CAS號： 73030714 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

白術內Ⅱ CAS號： 73069144 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

白術內Ⅰ CAS號： 73069133 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

蘆薈苷 CAS號： 1415732 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

苦玄參苷IB CAS號：  規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

苦玄參苷IA CAS號：  規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

漆黃素 CAS號： 528483 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

烏藥內 CAS號： 13476250 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

辛夷脂素 CAS號： 31008192 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

原蘇木素B CAS號： 102036293 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

龍血素B CAS號： 119425900 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢

蔓荊子黃素 CAS號： 479914 規(guī)格： HPLC≥98%;20mg 訂購|咨詢
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的DN段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）
10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數(shù)量相應增加2或3倍。
11. 在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好。