毛霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒 返回列表頁

PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

【產(chǎn)品名稱】毛霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒
【英文名稱】Mucor spp.
【產(chǎn)品編號】YSP6939
【包裝規(guī)格】50T
【預(yù)期用途】
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測，所用儀器為實時熒光PCR儀，可通過實時擴增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分。
【檢驗原理】
本試劑盒采用實時熒光PCR技術(shù)，針對鴨源性成分核酸序列設(shè)計特異性引物和熒光探針，通過實時熒光一步法RT-PCR（Taqman探針法）對鴨源性成分核酸進行定性檢測。
*的擴增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應(yīng)體系保證更高的擴增效率。以相同量的293T細胞cDNA為模板，擴增β-actin基因，與同類產(chǎn)品相比，UNICONTM qPCR Master Mix擴增信號更強，擴增效率更高。
?
PCR實驗方法步驟：
毛霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
熒光定量PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
產(chǎn)品僅用于科研其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。步驟(2)為：待測樣本與步(1)所述標準品經(jīng)同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數(shù)，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對定量檢測結(jié)果。
其中所述待測目的基因為本領(lǐng)域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
實驗步驟：
典型的PCR由
（1）高溫變性模板；
（2）引物與模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán)，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴增。其要步驟是：
將待擴增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合，兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因為模板從5’→3’方向延伸，合成DNA的新互補鏈。
98%5g10MG3香葉基5,7,2',4'四羥基黃111900RSV Antigen

黃體 訂購|咨詢 規(guī)格： 100mg 2號染色體開放閱讀框3抗體 IFN-γ ELISA Kit γ干擾素(IFN-γ)ELISA試劑盒

Oridonin腺苷標準品規(guī)格：規(guī)格：人α-淀粉酶1(Alpha-amylase 1)Polyclonal Antibody 0.2ml

人氧化低密度脂蛋白(OxLDL)UBE2U  泛素蛋白連接酶U抗體規(guī)格:96T/48T5Adenylic Acid規(guī)格:125mgATP酶檢測試盒20mg人膽管癌細胞，QBC939細胞1x10^6cells

98%25g5g5'香葉基5,7,2',4'四羥基黃111773Erythrocyte transketolase

8-姜酚;8-Gingerol 訂購|咨詢 規(guī)格： 20mg 轉(zhuǎn)錄因子MYB相關(guān)蛋白B抗體 Cortisol ELISA Kit 皮質(zhì)醇(Cortisol)ELISA試劑盒

Coenzyme Q10聯(lián)氨標準品規(guī)格：規(guī)格：人膜聯(lián)蛋白A6(ANXA6)Polyclonal Antibody 0.2ml

MMP2/Gelatinase A(Human Matrix metalloproteinase 2/Gelatinase A) ELISA kit  人基質(zhì)金屬蛋白酶2/明膠酶ACAS號：113520 花青素合成酶檢測試盒50THuman/人Elisa試盒3034524

OligoGreen（效果同OliGreen）ssDNA 定量檢測試劑 *2000次*5mg

氧化鉍 質(zhì)量規(guī)格：AR,>99% Bismuth oxide  小鼠睪間質(zhì)細胞瘤細胞英文名稱：MLTC-1

Human Fibrinogen  (親和純化)人纖維蛋白原現(xiàn)貨供應(yīng)抗核糖體P蛋白抗體檢測試盒100gHuman/人Elisa試盒477600752

香柑內(nèi)，5基補骨脂素OligoGreen（效果同OliGreen）ssDNA 定量檢測試劑 *2000次*5mg

無水鈉(for HPLC,≥99.0%(T)) 質(zhì)量規(guī)格：for HPLC,≥99.0%(T) Sodium sulfate anhydrous

human IgM  (免疫親和純化)人IgM*載脂蛋白E2檢測試盒10gHuman/人Elisa試盒4780794

順式和反式, 97%100mg1g低密度脂蛋白膽固醇(LDLC)檢測試劑盒(Sol比色法)gonadotropinreleasing hormone

 PC-3M(人前列腺細胞)5×106cells/瓶×2

Xylose Lysine Desoxycholate Agar250酰硫氨檢測試盒5mg程序性死亡分子1檢測試盒Rotavirus
毛霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒利血平;Alserin CAS號： 50555 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

長春質(zhì)堿;Catharanthine CAS號： 70674907 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

蓮心堿;Liensinine CAS號： 2586961 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

櫟櫻;Roburic acid CAS號： 6812813 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

鄰氧肉桂;2Methoxycin CAS號：  規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

雷帕;Sirolimus CAS號： 53123889 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

落干;Loganic acid CAS號： 22255409 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

長春新堿;Vincristine S CAS號： 2068782 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

蘆薈大黃素;Aloeemodin CAS號： 481721 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

連翹苷B;Forsythoside B CAS號： 81525135 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

連翹苷A;Forsythoside A CAS號： 79916771 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

辣椒素;Capsaicin CAS號： 2444464 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

連翹苷;Forsythin CAS號： 487412 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

魯斯可皂苷元;Ruscogenin CAS號： 472117 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢

蘆薈苷;barbaloin CAS號： 1415732 規(guī)格： 20mg 訂購|咨詢