潰瘍棒桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

潰瘍棒桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。

【產(chǎn)品名稱】潰瘍棒桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒
【英文名稱】Corynebacterium ulcerans
【產(chǎn)品編號(hào)】YSP6592
【包裝規(guī)格】50T
【預(yù)期用途】
產(chǎn)品僅用于科研本產(chǎn)品可用于肉及肉制品中鴨源性成分的定性檢測(cè)，所用儀器為實(shí)時(shí)熒光PCR儀，可通過實(shí)時(shí)擴(kuò)增曲線判斷樣品中是否存在鴨源性成分。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒采用實(shí)時(shí)熒光PCR技術(shù)，針對(duì)鴨源性成分核酸序列設(shè)計(jì)特異性引物和熒光探針，通過實(shí)時(shí)熒光一步法RT-PCR（Taqman探針法）對(duì)鴨源性成分核酸進(jìn)行定性檢測(cè)。
*的擴(kuò)增性能:
高性能的UNICONTM Taq DNA聚合酶及優(yōu)化的反應(yīng)體系保證更高的擴(kuò)增效率。以相同量的293T細(xì)胞cDNA為模板，擴(kuò)增β-actin基因，與同類產(chǎn)品相比，UNICONTM qPCR Master Mix擴(kuò)增信號(hào)更強(qiáng)，擴(kuò)增效率更高。
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PCR實(shí)驗(yàn)方法步驟：
潰瘍棒桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   

5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4：PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μl進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
PCR反應(yīng)鑒定——PCR反應(yīng)條件:

循環(huán)步驟	溫度	時(shí)間	循環(huán)數(shù)
預(yù)變性	94℃	5   min	1
變性	94℃	10   sec	30-40
退火	50-65℃	20   sec	30-40
延伸	72℃	30   sec/kb	30-40
終延伸	72℃	5   min	1

實(shí)驗(yàn)步驟：
典型的PCR由
（1）高溫變性模板；
（2）引物與模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個(gè)循環(huán)，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。其要步驟是：
將待擴(kuò)增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；
人工合成的兩個(gè)寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補(bǔ)結(jié)合，兩個(gè)引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴(kuò)增片段的長(zhǎng)短；
耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因?yàn)槟０鍙?’→3’方向延伸，合成DNA的新互補(bǔ)鏈。
Strongyloides edentatus無齒類圓線蟲PCR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細(xì)菌，細(xì)胞桿狀；兼性厭氧，發(fā)酵和發(fā)酵代謝。

Strongyloides edentatus無齒類圓線蟲染料法熒光定量PCR試劑盒模式菌株分類革蘭氏陰性細(xì)菌，兼性厭氧，呼吸和發(fā)酵代謝。模式菌株

Strongyloides edentatus無齒類圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽性細(xì)菌，菌體球形，成對(duì)或四聯(lián)排列。

Strongyloides equinus馬類圓線蟲PCR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細(xì)菌，細(xì)胞桿狀，連續(xù)傳代出現(xiàn)彎或S型細(xì)胞；微氧條件下，有固氮酶活性。

Strongyloides equinus馬類圓線蟲染料法熒光定量PCR試劑盒模式菌株分類革蘭氏陽性細(xì)菌，細(xì)胞桿狀，形成芽孢（稀少），同型發(fā)酵糖類產(chǎn)D-乳酸。模式菌株

Strongyloides equinus馬類圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒模式菌株分類革蘭氏陽性細(xì)菌，細(xì)胞桿狀，形成芽孢（稀少），同型發(fā)酵糖類產(chǎn)D-乳酸。模式菌株

Strongyloides papillosus乳突類圓線蟲PCR試劑盒模式菌株分類革蘭氏陽性細(xì)菌，形成芽孢。模式菌株

Strongyloides papillosus乳突類圓線蟲染料法熒光定量PCR試劑盒模式菌株分類革蘭氏陽性細(xì)菌，形成芽孢。模式菌株.Anerobic degradation of hemicellulose

Strongyloides papillosus乳突類圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒模式菌株分類革蘭氏陽性細(xì)菌，形成芽孢。模式菌株

Strongyloides ransomi豬類圓線蟲PCR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細(xì)菌，菌體桿狀周生鞭毛運(yùn)動(dòng)；兼性厭氧，發(fā)酵代謝。

Strongyloides ransomi豬類圓線蟲染料法熒光定量PCR試劑盒模式菌株分類革蘭氏陽性細(xì)菌，形成芽孢。模式菌株

Strongyloides ransomi豬類圓線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細(xì)菌，桿狀，好氧生長(zhǎng)，呼吸代謝。

Strongyloides spp.類圓線蟲通用PCR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陰性細(xì)菌，兼性厭氧，呼吸和發(fā)酵代謝。微生物肥料

Strongyloides spp.類圓線蟲通用染料法熒光定量PCR試劑盒非模式菌株研究革蘭氏陽性細(xì)菌，形成芽孢。

Strongyloides spp.類圓線蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒模式菌株分類嗜鹽古菌。模式菌株
潰瘍棒桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒含三聯(lián)基元蛋白23　TRI23 Polyclonal Antibody

含錨蛋白重復(fù)和不育α基元域1A　ANS1A Polyclonal Antibody

含亮氨酸重復(fù)序列和免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的Nogo受體作用蛋白2　LIGO2 Polyclonal Antibody

含亮氨酸重復(fù)序列和免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域的Nogo受體作用蛋白1　LIGO1 Polyclonal Antibody

含跨膜Emp24蛋白運(yùn)輸域蛋白1　TMED1 Polyclonal Antibody

含卷曲螺旋域蛋白80　CCD80 Polyclonal Antibody

含卷曲螺旋域蛋白8　CCDC8 Polyclonal Antibody

含卷曲螺旋和C2域1A　C2D1A Polyclonal Antibody

含桿狀病毒IAP重復(fù)2　BIRC2 Polyclonal Antibody
熒光定量PCR檢測(cè)方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線；
(2)待測(cè)樣本與步驟(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
產(chǎn)品僅用于科研其中步驟(1)為：將參照基因與待測(cè)目的基因片段等比例連接，克隆到同一個(gè)質(zhì)粒載體上，構(gòu)建一種可同時(shí)用于參照基因以及待測(cè)目的基因擴(kuò)增檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)品，并將所得標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度梯度稀釋后同時(shí)用于繪制參照基因以及待測(cè)目的基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
其中所述參照基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴(kuò)增區(qū)域，其中所述質(zhì)粒載體為本領(lǐng)域常規(guī)質(zhì)粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標(biāo)準(zhǔn)品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標(biāo)準(zhǔn)品中待測(cè)目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)曲線法應(yīng)用中目的基因與參照基因的濃度比例關(guān)系難以控制的問題，提高HER2基因擴(kuò)增檢測(cè)的可靠性。步驟(2)為：待測(cè)樣本與步(1)所述標(biāo)準(zhǔn)品經(jīng)同步進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增后，目的基因與參照基因按照各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各自的拷貝數(shù)，計(jì)算待測(cè)樣本的目的基因與參照基因拷貝數(shù)比值，即得目的基因的拷貝數(shù)相對(duì)定量檢測(cè)結(jié)果。
其中所述待測(cè)目的基因?yàn)楸绢I(lǐng)域常規(guī)待測(cè)目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴(kuò)增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴(kuò)增為本領(lǐng)域常規(guī)熒光定量PCR擴(kuò)增方法，所述熒光定量PCR擴(kuò)增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴(kuò)增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴(kuò)增。