當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)微生物污染時(shí)，挽救措施需要根據(jù)污染的類(lèi)型和程度進(jìn)行有針對(duì)性的處理。以下是一些常見(jiàn)的微生物污染及其挽救措施，參考了多篇專(zhuān)業(yè)文章的內(nèi)容：

1.細(xì)菌污染

特點(diǎn)：

培養(yǎng)液通常會(huì)出現(xiàn)渾濁、pH下降。

顯微鏡下可見(jiàn)細(xì)胞胞漿出現(xiàn)大量顆粒，細(xì)胞變圓或崩潰。

挽救措施：

丟棄污染細(xì)胞：如果污染細(xì)胞價(jià)值不大，建議直接丟棄。

消毒：尋找污染原因后，對(duì)操作室進(jìn)行消毒。

使用抗生素：若污染細(xì)胞價(jià)值較大，可嘗試使用抗生素清除細(xì)菌。聯(lián)合用藥比單獨(dú)用藥效果好，預(yù)防用藥比污染后再用藥效果好。

預(yù)防用藥一般用雙抗生素，污染后清除用藥需采用大于常用量5～10倍的沖洗法，于加藥后作用24～48小時(shí)，再換常規(guī)培養(yǎng)液。

2.真菌污染

特點(diǎn)：

短期內(nèi)培養(yǎng)液不渾濁，但在表面形成白色或黃色漂浮物。

高倍鏡下可見(jiàn)明顯的絲狀、管狀或樹(shù)枝狀菌絲。

挽救措施：

建議丟棄：真菌污染較難處理，通常建議消殺后丟棄污染的細(xì)胞和培養(yǎng)基。

3.支原體污染

特點(diǎn)：

支原體大小為0.1-0.3µm，可通過(guò)0.22µm和0.45µm孔徑濾膜。

常規(guī)光學(xué)顯微鏡下無(wú)法觀察到，但熒光顯微鏡下可用DAPI染色觀察到。

挽救措施：

丟棄污染細(xì)胞：同樣，如果污染細(xì)胞價(jià)值不大，建議直接丟棄。

使用支原體清除試劑：如zellshield細(xì)胞支原體去除劑（四代培養(yǎng)）處理，祛除支原體效果明顯，同時(shí)對(duì)細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外的革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽(yáng)性菌、病原蟲(chóng)、真菌等污染亦可有效預(yù)防。

4.黑膠蟲(chóng)污染

特點(diǎn)：

關(guān)于黑膠蟲(chóng)是否是一種生物還有爭(zhēng)議。

挽救措施：

根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)判斷：若細(xì)胞狀態(tài)尚可，可嘗試添加黑膠蟲(chóng)/支原體抑制劑培養(yǎng)2-3代看是否能轉(zhuǎn)陰；若細(xì)胞狀態(tài)很差，建議消殺后丟棄。

5.預(yù)防措施

無(wú)論哪種污染，預(yù)防都是關(guān)鍵：

嚴(yán)格執(zhí)行無(wú)菌操作：經(jīng)常更換手套、使用經(jīng)過(guò)有效消毒的培養(yǎng)器具和培養(yǎng)基等。

清潔和消毒實(shí)驗(yàn)環(huán)境：定期清潔和消毒實(shí)驗(yàn)室環(huán)境及設(shè)備，可用支原體祛除噴霧劑Mycoplasma Off™定期清潔實(shí)驗(yàn)室儀器、工作臺(tái)表面。

控制空氣中的微生物：使用高效過(guò)濾器的實(shí)驗(yàn)室通風(fēng)設(shè)備，定期更換過(guò)濾器。

識(shí)別和處理污染源：經(jīng)常檢查培養(yǎng)器具、培養(yǎng)基和試劑等是否存在污染，一旦發(fā)現(xiàn)污染，應(yīng)及時(shí)處理。

通過(guò)綜合以上挽救措施和預(yù)防措施，可以一定程度地減少細(xì)胞培養(yǎng)中的微生物污染，保證實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。