一、類器官收集及洗滌

1、類器官收集

移液器吸去培養(yǎng)基，每孔添加1-2mL左右4℃類器官傳代培養(yǎng)緩沖液(abs9730)，輕柔吹打基質(zhì)膠，收集在15mL離心管中（24孔板，每5孔為一組），加類器官傳代緩沖液定容至10mL（緩沖液越多，基質(zhì)膠被稀釋的越充分，越容易去除），4℃靜置10min或-20℃放置5min（目的是使基質(zhì)膠軟化，如果冰箱保溫效果強，冷凍3min），300g 4℃，離心5min棄上清。

2、類器官清洗

添加1mL類器官傳代培養(yǎng)緩沖液重懸，300g 4℃，離心5min棄上清。

二、類器官免疫熒光染色

1）4%多聚甲醛固定15min，PBS洗3次，每次2min；

2）0.5%Triton透膜20min，PBS洗3次，每次2min；（如果需檢測的目的蛋白屬于胞內(nèi)蛋白或者抗原抗體結(jié)合位點位于胞內(nèi)的跨膜蛋白，抗體孵育前需進行透膜處理）

3）1%BSA室溫封閉60min，PBS洗3次，每次2min；
4）5%BSA稀釋的一抗，4℃孵育過夜，PBS洗3次，每次2min；
5）5%BSA稀釋的TRITC標記的二抗，室溫避光孵育1h，PBS洗3次，每次2min；
6）5ug/mLDAPI避光孵育15min，PBS洗3次，每次2min；
7）將類器官輕柔鋪在載玻片上，吸水紙輕輕吸取多余殘留液體；
8）指甲油封片輕柔固定，于激光掃描共聚焦熒光顯微鏡下觀察并拍攝圖片。

注：PBS清洗時，可用槍頭輕輕吹起避免氣泡，待類器官沉淀到底部開始下一步操作。

本期小愛推薦：

好消息！Absin文獻獎勵重磅升級！

Absin特色產(chǎn)品線：

WB相關(guān)：ECL發(fā)光液、預(yù)染marker、預(yù)制膠；IHC相關(guān)：二抗試劑盒、組化筆；IP/CoIP試劑盒；激動劑/抑制劑；血清、BSA、蛋白酶K、CTB、TTX、CEE；凋亡試劑盒；呼吸爆發(fā)試劑盒；ELISA試劑盒；重組蛋白；抗體: 二抗、標簽抗體、對照抗體；定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標記/檢測)...