冰凍切片：

是一種在低溫條件下使組織快速冷卻到一定硬度，然后進(jìn)行切片的方法。因其制作過程較石蠟切片快捷、簡便，而多應(yīng)用于手術(shù)中的快速病理診斷，也是組織化學(xué)，特別是酶組織化學(xué)很常用的切片技術(shù)。

圖1 冷凍切片機(jī)

冰凍切片與石蠟切片對比：

OCT包埋劑的應(yīng)用：

與石蠟組織相比，冷凍切片的簡便快捷使其在臨床組織學(xué)診斷中應(yīng)用廣泛，特別適用于脂肪組織、神經(jīng)組織、髓鞘，以及肌肉的活檢染色。

OCT包埋劑是一種聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物，其用途是在冰凍切片時支撐組織，以增加組織的連續(xù)性，減少皺折及碎裂。OCT混合物為水溶性，故在漂片時可溶于水，在后續(xù)的染色中不會增加背景染色。愛必信的OCT包埋劑六折，質(zhì)量媲美櫻花，包埋效果被許多客戶肯定！

圖2 abs9756-110mL OCT包埋劑

冰凍切片樣本制備：

冰凍切片的樣本制備較為簡單。

方式一：盡量選用新鮮組織，用生理鹽水清洗掉表面血水，將組織修剪到一定大小，用吸水紙吸干表面水分（防止水分在速凍過程中形成冰晶），直接進(jìn)行后續(xù)包埋。

方式二：選取新鮮組織，修整到一定大小，至于多聚甲醛中低溫固定18-24h，再經(jīng)過30%的蔗糖沉降脫水（或者梯度脫水，15%蔗糖中脫水至沉底，再轉(zhuǎn)到30%蔗糖中沉底），再經(jīng)過OCT的包埋。

包埋：提前準(zhǔn)備泡沫箱，倒入一定量的液氮，在包埋磨具中加入少量OCT覆蓋磨具底部（避免產(chǎn)生氣泡，若產(chǎn)生氣泡可用注射器或者槍頭吸棄），將組織至于OCT包埋劑中，調(diào)整組織位置，加入OCT包埋劑全面覆蓋組織（避免產(chǎn)生氣泡），用鑷子夾住磨具，至于液氮上方，大概10-20s后，組織就會迅速的冰結(jié)成塊，若不能及時切片，用錫紙包裹，做好標(biāo)記，至于-80℃冰箱內(nèi)保存。

圖3 冰凍切片一次性包埋磨具

許多老師糾結(jié)于方案一和方案二的選擇，這里給到的建議是，如果是手術(shù)中的快速診斷，簡單的HE染色，可以用方案一，結(jié)果快，但是在追求速度的同時，極大的降低了靈敏度，科研實驗或者做多重?zé)晒饷庖呓M化，推薦使用方案二，為的是保證染色時能精確定位，提高特異度和靈敏度。

切片制作：

1、切片前調(diào)整冷凍切片機(jī)溫度在-25℃~-18℃；

2、在標(biāo)本拖上涂適量包埋劑，將冷凍包埋好的樣本取出，至于標(biāo)本拖上冷凍固定；

3、將樣本拖至于冷凍切片機(jī)的機(jī)頭上，調(diào)整位置；

4、調(diào)整切片厚度進(jìn)行修片（修片時厚度可以大一些），修整標(biāo)本至組織塊暴露。用毛筆將操作區(qū)清掃干凈；

5、重新調(diào)整切片厚度，進(jìn)行正式切片，切下的組織片在防卷板下方平鋪，可用毛筆輔助組織片平整，用防脫載玻片平穩(wěn)吸附切片。

注意事項：

1、操作時，玻璃機(jī)蓋不可打開過大，以免溫度變化；

2、載玻片吸附切片之前應(yīng)置于室溫，否則難以吸附；

3、樣本拖涂的包埋劑要盡量平整，不可一邊高一邊低，會影響切面位置。

圖4 愛必信組化試劑盒

冰凍切片常見問題及對策：

1、溫度對切片的影響

組織塊過冷切片時易碎裂或成粉末狀，溫度不足，組織回軟也不能保證切片的完整。

2、切片皺縮或卷縮

可能的原因有：刀片不夠鋒利、防卷板有異物、防卷板與刀片位置不協(xié)調(diào)他、包埋劑包埋不全。

3、切片脫落或吸附性差

可能的原因有：實驗前防脫載玻片至于冷凍切片機(jī)內(nèi)，樣本中有壞死區(qū)域，切片過厚、載破片有異物。

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