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HRP酶標(biāo)二抗和熒光二抗有什么區(qū)別?分別在什么時候用?

閱讀:783      發(fā)布時間:2024-9-20
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在生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中,二抗的選擇至關(guān)重要。其中,HRP酶標(biāo)二抗和熒光二抗是兩種常見的二抗類型,它們各具特色,并在不同的實(shí)驗(yàn)場景下發(fā)揮著關(guān)鍵作用。

 

一、HRP酶標(biāo)二抗

 

1. 定義及特性

HRP酶標(biāo)二抗,即辣根過氧化物酶(Horseradish Peroxidase, HRP)標(biāo)記的二抗,是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常規(guī)用的二抗。其特點(diǎn)包括比活性高、穩(wěn)定性好、分子量小、純酶容易制備等,因此在免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中廣泛應(yīng)用。

 

2. 應(yīng)用場景

HRP酶標(biāo)二抗常用于如免疫印跡(WB)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)以及免疫組織化學(xué)(IHC)等實(shí)驗(yàn)。在這些實(shí)驗(yàn)中,HRP標(biāo)記的二抗與底物反應(yīng),產(chǎn)生可檢測的化學(xué)發(fā)光信號,從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的檢測。例如,在WB實(shí)驗(yàn)中,HRP酶標(biāo)二抗能夠檢測樣品中的特定蛋白,并通過ECL試劑顯色,使信號可視化。

 

 

HRP在不同實(shí)驗(yàn)中對應(yīng)的底物及檢測原理和方法


實(shí)驗(yàn)

底物

檢測原理和方法

WB

Luminol和H2O2

魯米諾在堿性條件下與過氧化氫(H2O2)反應(yīng),在辣根過氧化物酶(HRP)的催化下產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號,可用CCD凝膠成像儀進(jìn)行檢測。

Elisa

TMB

在HRP的作用下,TMB被氧化并產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物,隨后在強(qiáng)酸條件下變?yōu)辄S色。使用酶標(biāo)儀在450nm波長下進(jìn)行檢測。

HIC

DAB

DAB常用于組織化學(xué)和免疫組化實(shí)驗(yàn),與HRP反應(yīng)后形成不溶性棕色沉淀物,可以使用光學(xué)顯微鏡檢測。




 

二、熒光二抗

 

1. 定義及特性

熒光二抗,即帶有熒光基團(tuán)的二抗,能夠在激發(fā)光下發(fā)出熒光信號。常用的熒光基團(tuán)包括Cy3、Cy5、Alexa Fluor等。這些熒光基團(tuán)具有不同的激發(fā)和發(fā)射波長,可以實(shí)現(xiàn)多標(biāo)染色實(shí)驗(yàn)中的不同顏色標(biāo)記。

 

2. 應(yīng)用場景

熒光二抗廣泛應(yīng)用于免疫熒光(IF)、免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)以及流式細(xì)胞儀(Flow cytometry)等實(shí)驗(yàn)。在這些實(shí)驗(yàn)中,熒光二抗與目標(biāo)蛋白結(jié)合后,通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀等設(shè)備檢測熒光信號,從而實(shí)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的定位和定量。例如,在IF實(shí)驗(yàn)中,熒光二抗可以標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)的特定蛋白,并通過熒光顯微鏡觀察其在細(xì)胞內(nèi)的分布和表達(dá)情況。

 

3. 多標(biāo)染色實(shí)驗(yàn)

熒光二抗在多標(biāo)染色實(shí)驗(yàn)中具有特殊優(yōu)勢。通過選擇不同激發(fā)和發(fā)射波長的熒光基團(tuán),可以實(shí)現(xiàn)多種目標(biāo)蛋白的同時檢測。例如,可以使用Alexa Fluor 488和Alexa Fluor 594兩種熒光基團(tuán)分別標(biāo)記兩種不同的目標(biāo)蛋白,并通過熒光顯微鏡同時觀察它們在細(xì)胞內(nèi)的分布和表達(dá)情況。

 

 

三、酶標(biāo)二抗和熒光二抗的對比

 

HRP酶標(biāo)二抗和熒光二抗各具特色,分別在不同的實(shí)驗(yàn)場景下發(fā)揮關(guān)鍵作用。HRP酶標(biāo)二抗以其高靈敏度和穩(wěn)定性在WB、ELISA和IHC等實(shí)驗(yàn)中廣泛應(yīng)用;而熒光二抗則以其特殊的熒光信號和多標(biāo)染色能力在IF、ICC和流式細(xì)胞儀等實(shí)驗(yàn)中展現(xiàn)出特殊優(yōu)勢。在實(shí)驗(yàn)中,應(yīng)根據(jù)具體需求和實(shí)驗(yàn)條件選擇合適的二抗類型,以提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和可靠性。

 


 

HRP酶標(biāo)二抗

熒光二抗

定義

辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的二抗

帶有熒光基團(tuán)的二抗

特性

催化底物產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光信號

在激發(fā)光下發(fā)出熒光信號

應(yīng)用場景

免疫印跡(WB)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、免疫組織化學(xué)(IHC)等

免疫熒光(IF)、免疫細(xì)胞化學(xué)(ICC)、流式細(xì)胞儀(Flow cytometry)等

靈敏度

高,可挑戰(zhàn)fg級別

中等至高,取決于熒光基團(tuán)和檢測設(shè)備

多標(biāo)染色

不適用于多標(biāo)染色

適用于多標(biāo)染色,可同時檢測多種目標(biāo)蛋白

信號穩(wěn)定性

相對穩(wěn)定,不易受外界因素影響

對光敏感,需避免長時間暴露于強(qiáng)光下

可視化方法

化學(xué)發(fā)光成像(如ECL試劑顯色)

熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測

操作簡便性

操作相對簡單,但可能涉及化學(xué)發(fā)光底物的處理

操作簡便,直接通過熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀觀察

成本

相對較低(基于常規(guī)生化試劑)

可能較高,尤其是高級熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀的使用

優(yōu)點(diǎn)

高靈敏度、穩(wěn)定性好、成本相對較低

多標(biāo)染色能力強(qiáng)、可視化效果好、操作簡便

缺點(diǎn)

不適用于多標(biāo)染色、對底物量有一定要求

對光敏感、成本可能較高




 

Absin產(chǎn)品線:

爆款產(chǎn)品:試劑盒(mIHC、IHC、凋亡、ELISA、ChIP、Co-IP、TR-FRET、生化檢測、殘留檢測、多因子檢測);細(xì)胞培養(yǎng)(類器官試劑盒+基質(zhì)膠,胎牛血清+培養(yǎng)添加劑+細(xì)胞因子)、分化試劑盒;分子(mRNA合成服務(wù)+提取試劑盒);化合物大包裝;輔助試劑、耗材/儀器、定制服務(wù)(抗體/多肽/蛋白/標(biāo)記/檢測)...

特色產(chǎn)品:雞胚提取物CEE、B27、N2、霍亂毒素B亞單位CTB、牛腦垂體提取物BPE、百日咳毒素PTX、重組人胰島素Insulin、人源低密度脂蛋白LDL...

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