技術(shù)文章
人α干擾素ELISA試劑盒樣品收集、處理及保存方法操作步驟
閱讀:534 發(fā)布時(shí)間:2019-9-18人α干擾素ELISA試劑盒試驗(yàn)原理:
IFN-Α試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知IFN-Α濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將IFN-Α和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中IFN-Α的濃度呈比例關(guān)系。
自備材料:
1. 蒸餾水。
2. 加樣器:5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等。
4.
樣品收集、處理及保存方法:
1、血清……操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原
和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅
細(xì)胞迅速小心地分離。
2、 血漿……EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3、 細(xì)胞上清液……1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、 組織勻漿……將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。
5、 保存……如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。