登革熱病毒Ⅰ型（DFV-Ⅰ）核酸檢測(cè)試劑盒方法

登革熱病毒Ⅰ型（DFV-Ⅰ）核酸檢測(cè)試劑盒方法是即用型PCR試劑盒的改良產(chǎn)品， 含有Taq DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 增強(qiáng)劑、上樣染料等所有PCR 所需要的成分，用戶只需加入模板和引物即可進(jìn)行PCR 反應(yīng)，具有廣泛的用途。

樣本采集、存放及運(yùn)輸：
1、登革熱病毒Ⅰ型(DFV-Ⅰ)核酸檢測(cè)試劑盒方法樣本采集：各類(lèi)型樣本按照常規(guī)方法采集；
2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h，-70℃以下可長(zhǎng)期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（zui多凍融3次）；
3、運(yùn)輸：采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
普通PCR反應(yīng)流程:

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使用及效果：
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子（約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm（或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中，95℃保溫10-15 分鐘，加入0.1 mL 溶液B，混勻，直接取上清液（相當(dāng)于PCR 體積的1/10）作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。

產(chǎn)品名稱	規(guī)格	分類(lèi)
登革熱病毒Ⅰ型(DFV-Ⅰ)核酸檢測(cè)試劑盒方法	48T	PCR檢測(cè)試劑盒

自備物品：
15毫升錐形離心管：用于制備樣品的容器
比色皿：用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板：用于比色的容器
分光光度儀：用于比色分析
酶標(biāo)儀：用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃
準(zhǔn)備物品
清理液（A）                                   毫升
染色液（t B）                                   微升
稀釋液（C）                                   毫升
溶解液（tD）                                   毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)                                   1份

反應(yīng)五要素:
登革熱病毒Ⅰ型(DFV-Ⅰ)核酸檢測(cè)試劑盒方法參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。

3，5-二氟-2-吡分子式：140.09分子量： C6H2F2N2英文名稱：3, 5- two -2- fluoride cyanopyridinesCAS號(hào)：298709-29-2

4-戊氧-4'-聯(lián)(5OCB)分子式：265.35分子量： C18H19NO英文名稱：4- pentyloxy -4'- cyano biphenyl (5OCB)CAS號(hào)：52364-71-3

3-甲吡分子式：93.12分子量： C6H7N；CHCHCHNCHCCH3英文名稱：3- methyl pyridineCAS號(hào)：108-99-6

鹽酸萘甲唑啉分子式：246.74分子量： C14H15ClN2英文名稱：Hydrochloric acid naphthaleneCAS號(hào)：550-99-2

巖白菜素英文名稱：BergeninumCAS號(hào)：477-90-7分子式：328.27144分子量：C14H16O9

順式-2,6-二甲啉分子式：115.17分子量： C6H13NO英文名稱：CIS -2,6- two methyl morpholineCAS號(hào)：6485-55-8

5-氯尿嘧分子式：146.53分子量： C4H3ClN2O2英文名稱：5- 5-chlorouracilCAS號(hào)：1820-81-1

2,2-聯(lián)喹啉分子式：256.3分子量： C18H12N2英文名稱：2,2- couplingCAS號(hào)：119-91-5

1,3-雙(α-羥六氟異丙)分子式：410.16分子量： C12H6F12O2英文名稱：1,3- bis (alpha hydroxy six f Yi Bingji) benzeneCAS號(hào)：802-93-7

2-乙氧吡分子式：123.15分子量： C7H9NO英文名稱：2-, BCAS號(hào)：14529-53-4

4-溴-2-氯三氟甲分子式：259.45分子量： C7H3BrClF3英文名稱：4- -2- three fCAS號(hào)：467435-07-0

登革熱病毒Ⅰ型(DFV-Ⅰ)核酸檢測(cè)試劑盒方法GAS 6  生長(zhǎng)停滯特異性蛋白6抗體 0.2ml

Caspr2  軸突相關(guān)CNTP2蛋白抗體（少突膠質(zhì)細(xì)胞） 0.2ml

Lin-28B  RNA結(jié)合蛋白LIN28B抗體 0.2ml

KLHL36/C16orf44  Kelch樣蛋白36抗體 0.2ml

RBPJK/RBP-J  Notch轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白R(shí)BPJK抗體 0.2ml

PLASTIN3/T Plastin  絲束蛋白T Plastin抗體 0.2ml

phospho-YWHAE(Thr232)  磷酸化14-3-3E蛋白抗體 0.1ml

HMGA2  高遷移率族蛋白A2抗體 0.1ml

Rabbit anti-mouse Kappa light chain/PE  PE標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈 0.1ml

TPST2  酪蛋白硫酸轉(zhuǎn)移酶2抗體 0.2ml

CCAP/Cardioactive Peptide  心動(dòng)加速蛋白多肽抗體 0.2ml

Laminin alpha 1  層粘蛋白α1抗體 0.1ml