人細小病毒（B19）核酸檢測試劑盒方法

 人細小病毒(B19)核酸檢測試劑盒方法使用及效果：
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子（約1/4 黃豆大?。┗蛑睆郊s為0.5-0.7 cm（或面積相當?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中，95℃保溫10-15 分鐘，加入0.1 mL 溶液B，混勻，直接取上清液（相當于PCR 體積的1/10）作為模板進行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。

樣本采集、存放及運輸：
1、樣本采集：各類型樣本按照常規(guī)方法采集；
2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過72h，-70℃以下可長期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（zui多凍融3次）；
3、運輸：采用泡沫箱加冰密封進行運輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
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自備物品：
 人細小病毒(B19)核酸檢測試劑盒方法15毫升錐形離心管：用于制備樣品的容器
比色皿：用于比色的容器
96孔酶標板：用于比色的容器
分光光度儀：用于比色分析
酶標儀：用于微量樣品比色分析
儲存條件：
14℃或－20℃
準備物品
清理液（A）                                   毫升
染色液（t B）                                   微升
稀釋液（C）                                   毫升
溶解液（tD）                                   毫升
產(chǎn)品說明書                                   1份

噻蟲啉分子式：252.72分子量： C10H9ClN4S英文名稱：Insect pestCAS號：111988-49-9

1-酰異喹啉分子式：233.26分子量： C16H11NO英文名稱：1- phenyl groupCAS號：16576-23-1

亞硝鈷鈉英文名稱：Sodium nitriteCAS號：13600-98-1分子式：403.94分子量： CoN6Na3O12

冬凌草甲素英文名稱：OridoninCAS號：28957-04-2分子式：364.43272分子量：C20H28O6

乙-乙銨緩沖溶液英文名稱：Acetic acid ammonium acetate buffer solutionCAS號：分子式：分子量：

2-萘分子式：158.2分子量： C10H10N2英文名稱：2- naphthalene hydrazineCAS號：2243-57-4

奧沙利鉑英文名稱：OxaliplatinCAS號：63121-00-6分子式： 397.3 g/mol分子量： C8H14N2O4Pt

三氟甲分子式：146.11分子量： C7H5F3英文名稱：Three fluorine tolueneCAS號：36015

性黃RN英文名稱：Acid yellow RNCAS號：6359-85-9分子式：549.55457分子量： C23H20N5NaO6S2

2-氯-7-甲喹啉分子式：177.5分子量： C10H8ClN英文名稱：2- -7- methyl groupCAS號：875100

4-分子式：100.16分子量： C5H12N2英文名稱：Aminopiperidine 4-CAS號：13035-19-3

 人細小病毒(B19)核酸檢測試劑盒方法Histone H4  組蛋白H4抗體 0.1ml

Rabbit Anti-human IgM/Cy3  Cy3標記的兔抗人IgM 0.1ml

Goat Anti-Mouse IgG/Cy7  Cy7標記的羊抗小鼠IgG 0.1ml

Snake poison Protein  蛇毒蛋白抗體（中華眼鏡蛇） 0.2ml

EHZF/ZN521  鋅指蛋白521抗體 0.1ml

LCA5L  致盲基因LCA5樣蛋白抗體 0.2ml

POU6F2  轉(zhuǎn)錄因子RPF1抗體 0.2ml

MURF3  肌肉特異性環(huán)指蛋白3抗體 0.2ml

FAF1  Fas相關(guān)1因子抗體 0.1ml

ANKRD54  錨蛋白重復(fù)域54抗體 0.2ml

Robo  軸突導(dǎo)向受體抗體 0.1ml

phospho-PTPN6(Ser591)  磷酸化蛋白酪氨酸磷酸酶1C抗體 0.1ml

反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機分布，避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補，特別是3'端的互補，否則會形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個堿基，應(yīng)嚴格要求配對，以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點， 被擴增的靶序列有適宜的酶切位點， 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增，且可增加引物之間形成二聚體的機會。