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過(guò)碘酸雪夫反應(yīng)(PAS)——顯示細(xì)胞內(nèi)糖原資料說(shuō)明

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(一)原理

組織、細(xì)胞的多糖、粘多糖及粘蛋白等都可用PAS法來(lái)顯示,其化學(xué)基礎(chǔ)是利用過(guò)碘酸的氧化作用,打開(kāi)碳鏈形成醛,生成的醛基與Schiff試劑中的無(wú)色品紅反應(yīng)形成紫紅色化合物。

(二)方法

l.取l~2mm厚的肝組織塊,用Carnoy氏液4℃固定4~6小時(shí)。

2.乙醇脫水、二甲苯透明。石蠟包埋,切片。

3.用70%乙醇展片。

4.脫蠟:二甲苯(1)5分鐘→二甲苯(2)5分鐘→100%乙醇5分鐘→含1%火棉膠的乙醇液1分鐘→70%乙醇1分鐘。

5.直接浸入過(guò)碘酸酒精液反應(yīng)5~15分鐘,經(jīng)70%乙醇洗片刻。

6.浸入Schiff氏酒精液反應(yīng)15分鐘。

7.亞硫酸水洗三次,以洗去多余的非特異性結(jié)合的色素,以及擴(kuò)散的染料。

8.流水沖洗3~5分鐘。

9.蒸餾水洗。

10.浸入Ehrlich蘇木精復(fù)染20~30秒,使細(xì)胞核著色。

11.脫水:95%乙醇3分鐘二次→100%乙醇3分鐘二次→二甲苯透明10分鐘二次。

12.加蓋片鏡檢或樹(shù)膠封固后鏡檢。 

(三)結(jié)果

細(xì)胞中呈紫紅的顆粒即為糖原。

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