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轉(zhuǎn)化細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)
閱讀:575 發(fā)布時(shí)間:2018-3-7轉(zhuǎn)化細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)
(1)根據(jù)待測(cè)細(xì)胞體積大小選擇合適孔徑的ThinCert。常用的為8.0-μm孔徑
(如AGS細(xì)胞),如果細(xì)胞體積較大可以考慮用10-μm孔徑;
(2)根據(jù)待測(cè)細(xì)胞遷移能力強(qiáng)弱調(diào)整細(xì)胞數(shù)和遷移時(shí)間。常規(guī)24-well
ThinCert接種細(xì)胞數(shù)約為2≈5×104/well,遷移時(shí)間12≈36小時(shí);
(3)由于Greiner公司的24-Transwell內(nèi)含24個(gè)獨(dú)立的ThinCert,為了避免
操作污染,每次實(shí)驗(yàn)可預(yù)先另準(zhǔn)備一塊24孔普通培養(yǎng)板(Greiner);
(4)如果細(xì)胞遷移能力較弱,下室液體可用3T3細(xì)胞無血清培養(yǎng)24小時(shí)獲得的
上清加50μg/ml FN(Fibronectin),具體可查閱相關(guān)文獻(xiàn);
(5)細(xì)胞懸液加入膜中央,盡量保證液面水平;
(6)固定染色擦洗時(shí)動(dòng)作小心,避免擦去膜底面的細(xì)胞。但一定要充分擦凈膜
表面上未遷移的細(xì)胞,以免影響讀數(shù)。尤其是膜周邊上可用細(xì)牙簽或小鑷
子纏上濕棉花擦洗,但要小心避免將膜戳破;
(7)Chamber和膜上都無法標(biāo)記,操作時(shí)應(yīng)小心避免混淆實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組;
(8)充分晾干,避免殘留水分導(dǎo)致鏡下聚焦不一致。
細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)(cell invasion assay)
轉(zhuǎn)化細(xì)胞實(shí)驗(yàn)材料
(1)Matrigel (BD 5mg/ml),-20℃保存
(2)其余材料同遷移實(shí)驗(yàn)
Cloprostenol Sodium 氯前列烯醇鈉標(biāo)準(zhǔn)品 55028-72-3 400mg
Levocarnitine 左卡尼汀標(biāo)準(zhǔn)品 541-15-1 400mg
Etodolac 依托度酸標(biāo)準(zhǔn)品 41340-25-4 400mg
Carbidopa 卡比多巴標(biāo)準(zhǔn)品 38821-49-7 400mg
Climbazole 苯咪丁酮標(biāo)準(zhǔn)品 38083-17-9 400mg
Zidovudine 齊多夫定標(biāo)準(zhǔn)品 30516-87-1 400mg
Cefazolin 頭孢唑林鈉標(biāo)準(zhǔn)品 25953-19-9 400mg
Cephalexin 頭孢氨芐標(biāo)準(zhǔn)品 23325-78-2 400mg
Mafenide Acetate 醋酸磺胺米隆標(biāo)準(zhǔn)品 13009-99-9 400mg
Octisalate (Octyl Salicylate) 水楊酸乙基己酯標(biāo)準(zhǔn)品 118-60-5 400mg
Tilmicosin 替米考星標(biāo)準(zhǔn)品 108050-54-0 400mg
Ioxilan 碘昔蘭標(biāo)準(zhǔn)品 107793-72-6 400mg
轉(zhuǎn)化細(xì)胞