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測定轉(zhuǎn)化細(xì)胞周期方法的操作步驟

閱讀:178          發(fā)布時間:2018-4-13

轉(zhuǎn)化細(xì)胞周期指細(xì)胞一個世代所經(jīng)歷的時間。從一次細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束為一個周期。細(xì)胞周期反應(yīng)了細(xì)胞增殖速度。單個細(xì)胞的周期測定可采用縮時攝影的方法,但它不能代表細(xì)胞群體的周期,故現(xiàn)多采用其他方法測群體周期。測定細(xì)胞周期的方法很多,有同位素標(biāo)記法、細(xì)胞計數(shù)法等.我們看下操作步驟有哪些?
1、細(xì)胞生長至指數(shù)期時,向培養(yǎng)液中加入BrdU,使zui終濃度為10μg/ml。
2、44小時加秋水仙素,使每ml中含0.1μg。
3、48小時后常規(guī)消化細(xì)胞至離心管中,注意培養(yǎng)上清的漂浮細(xì)胞也要收集到離心管中。
4、常規(guī)染色體制片(見第三部分:染色體技術(shù))。
5、染色體玻片置56℃水浴鍋蓋上,鋪上2×SSC 液,距紫外燈管6cm處紫外照射30分鐘。
6、棄去2×SSC液,流水沖洗。
7、Giemsa液染色10分鐘,流水沖洗,晾干。
8、轉(zhuǎn)化細(xì)胞鏡檢100個分裂相,計*、二、三、四細(xì)胞期分裂指數(shù)。
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