產(chǎn)品屬性:
中文名稱:GSK-3β抑制劑(Indirubin-3-monoxime)
英文名稱:Indirubin-3-monoxime
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
發(fā)貨周期:1~3天
公司產(chǎn)品僅用于科研
商品介紹:
Indirubin-3-monoxime是一種有效的GSK-3β抑制劑,相對較弱的5-Lipoxygenase抑制劑,IC50值分別為22nM和7.8-10μM;同時對CDK5/p25和CDK1/cyclin B也有作用,IC50值分別為100和180nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:160807-49-8 別名:Indirubin-3-oxime 純度:99.70% 分子量:277.28 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
細(xì)胞生物學(xué)研究有以下幾個方面:
細(xì)胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細(xì)胞核、染色體以及基因表達(dá)的研究;
②生物膜與細(xì)胞器的研究;
③細(xì)胞骨架體系的研究;
④細(xì)胞增殖及其調(diào)控;
⑤細(xì)胞分化及其調(diào)控;
⑥細(xì)胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細(xì)胞的起源與進(jìn)化;
⑧細(xì)胞工程.
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;
2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;
5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
Lonsdalea quercina subsp. quercina人抗甲狀腺微粒體抗體Anti-SLC4A1AP Antibody人分泌型免疫球蛋白A(SIgA)
德曼鏈霉菌小鼠25羥基維生D3Anti-SLC4A1AP Antibody人活化Ⅻ(FⅫa)
康寧木霉大鼠白介3Anti-SLC39A9 Antibody人活化Ⅻ(FⅫa)
橄欖色青霉大鼠白介5Anti-SLC52A1 Antibody人游離蛋白S(FP-S)
巴氏醋桿菌人抗甲狀腺球蛋白抗體Anti-SLC4A1AP Antibody人游離蛋白S(FP-S)
盤孢屬小鼠Ⅲ型前膠原肽Anti-SLC52A1 Antibody人異常凝血原(APT)
香菇小鼠維生CAnti-SLC52A2 Antibody人異常凝血原(APT)
泡盛曲霉人谷脫羧自身抗體Anti-SLC52A2 Antibody人循環(huán)免疫復(fù)合物(CIC)
無花果擬盤多毛孢大鼠苗條受體Anti-SLC5A2 Antibody人循環(huán)免疫復(fù)合物(CIC)
巴氏醋桿菌巴氏亞種人抗血小板抗體IgG/M/AAnti-SLC5A3 Antibody人血小板相關(guān)抗體IgM(PA-IgM)
螢光假單胞桿菌小鼠Ⅱ型膠原Anti-SLC6A15 Antibody人血小板相關(guān)抗體IgM(PA-IgM)
嗜鹽鹽水球形菌大鼠瘦Anti-SLC6A6 Antibody人血纖肽/纖維蛋白肽A(FPA)
光亮小紅孔菌人抗淋巴球蛋白Anti-SLC5A6 Antibody人血纖肽/纖維蛋白肽A(FPA)
球孢枝孢大鼠白血病抑制因子Anti-SLC6A16 Antibody人纖溶原(Plg)
死亡谷放線多孢菌小鼠維生B6Anti-SLC6A17 Antibody人纖溶原(Plg)
田頭菇大鼠L選擇Anti-SLC8A1 Antibody人性T淋巴相關(guān)抗原4(CTLA-4/CD152)
環(huán)指蛋白92抗體核盤菌M08#15
環(huán)指蛋白調(diào)節(jié)蛋白激C蛋白抗體雙色蠟?zāi)ⅲú惶峁㎝12#10
TRIM50蛋白抗體辣椒疫霉菌15A7
環(huán)指蛋白88抗體大馬勃菌LW-5F3
GSK-3β抑制劑(Indirubin-3-monoxime)棱柱散尾中華變型 乙酰丁香酮
解烴棒桿 DL-異亮
變異庫克 巖藻黃質(zhì)
細(xì)鏈格孢 新魯斯可皂苷元
釀酒酵母 L-異亮
灰紅鏈霉 新苦味
中慢生華癸根瘤 香紫蘇二
阪崎腸桿 西門木炔酸乙酯
麻孢毛殼 西門木炔酸
枯草芽孢桿 維司那定
假單胞 水蘇堿
牛肝屬 十七碳酸甲酯
小鱒魚大洋芽孢桿英考丹納亞種 氫樟柳堿
百色腐霉 氫加蘭他敏
類干酪乳桿 青陽參苷元
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)