商品介紹:
Shikonin是一個TMEM16A chloride通道的抑制劑,IC50值是6.5uM.。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:517-89-5 別名:C.I.75535;Isoarnebin 4 純度:99.64% 分子量:288.3 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來時,加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細(xì)胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細(xì)胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
栗疫菌眼部白化病相關(guān)蛋白OA1/蛋白偶聯(lián)受體143抗體Anti-ABCG2 Antibody多萜長二磷寡糖蛋白環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移(DDOST/OST-48)
腐生葡萄球菌癌基因蛋白抑瘤M抗體Anti-ABCG2 Antibody多肽YY(Peptide-YY)
豇豆慢生根瘤菌卵巢癌相關(guān)基因2蛋白抗體Anti-ABCG2 Antibody(PB0380)多免疫球蛋白受體(poly-IgR)
大腸埃希氏菌跨膜蛋白Orai2抗體Anti-ABCG5 Antibody多聚血清蛋白(PHSA)
耶爾森氏菌耳聾、常染色體隱性遺傳22抗體Anti-ABCG5 Antibody多聚腺苷二磷核糖聚合(PARP)
水稻節(jié)桿菌1號染色體開放閱讀框80抗體Anti-ABCG8 Antibody多聚ADP核糖聚合(PARP)
云芝栓孔菌(變色栓菌)寡腺苷合成-1Anti-ABCG4 Antibody多功能蛋白聚糖(VS)
山綠豆根瘤菌KLHDC9蛋白抗體Anti-ABHD5 Antibody(PB1073)多功能蛋白聚糖(versican)
海陳文新氏菌少突膠質(zhì)轉(zhuǎn)錄因子3抗體Anti-ABI1 Antibody多巴色異構(gòu)(DT)
葡萄座腔菌螺旋轉(zhuǎn)錄因子OTP抗體Anti-ABCG8 Antibody多巴脫羧(DDC)
總狀毛霉小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌膜通道蛋白抗體Anti-ABI1 Antibody(PB0459)多巴-β羥化(DBH)
大腸埃希菌緊密連接蛋白/小分子膠原蛋白OCEL1抗體Anti-ABL1 Antibody多巴D2受體(D2R)
根瘤菌富含脯突觸相關(guān)蛋白SHANK3抗體Anti-ABI2 Antibody多巴D1受體(D1R)
鮑魚側(cè)耳癌調(diào)蛋白/癌鈣蛋白抗體Anti-ABL2 Antibody多巴(DA)
樹舌靈芝少突髓磷脂糖蛋白抗體Anti-ABL2 Antibody(PB0959)對氧磷-3(PON3)
Magnivallibacter阿片樣物質(zhì)結(jié)合蛋白/粘附分子樣蛋白抗體Anti-ABR Antibody對氧磷(PON)
海綿假單胞菌Pseudomonas│pachastrellae 質(zhì)量規(guī)格:>15Units/mg protein
豌豆根瘤菌Rhizobium│leguminosarum 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,合物,BR
蒙氏假單胞菌Pseudomonas│monteilii Elomari et al. 質(zhì)量規(guī)格:>99%
TMEM16A chloride通道抑制劑(Shikonin)紫皮麗菇 10%胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基顆粒軟骨蛋白聚糖G1;G2片段Elisa
豬鏈球分型血清參考品 血清型 SS12 胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基(TSB)顆粒軟骨寡聚基質(zhì)蛋白Elisa
釀酒酵母 玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基顆粒狀腺原氨酸Elisa
桑樹枝枯病 改良馬丁瓊脂培養(yǎng)基顆粒神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白Elisa
拜耳接合酵母 1-乙酰咪唑神經(jīng)生長導(dǎo)向因子Elisa
鏈格孢 改良馬丁培養(yǎng)基顆粒神經(jīng)生長因子Elisa
熒光假單胞 硫乙酸鹽流體培養(yǎng)基顆粒神經(jīng)肽YElisa
枯草芽孢桿 液體硫乙酸鹽培養(yǎng)基顆粒神經(jīng)營養(yǎng)因子3Elisa
毛栓 緩沖蛋白胨水(BPW)顆粒神經(jīng)元烯化Elisa
橄欖灰鏈霉 營養(yǎng)瓊脂(NA)顆粒腎Elisa
根霉 營養(yǎng)肉湯(NB)顆粒生長分化因子15Elisa
新月彎孢 平板計數(shù)瓊脂(PCA)顆粒生長Elisa
巴氏醋桿 MEM維持液生長抑Elisa
奇異球?qū)?/span> Cary-Blair氏運送培養(yǎng)基管瘦Elisa
球孢白僵 Cary-Blair氏運送培養(yǎng)基管四氫Elisa