以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
Sofosbuvir impurity H是sofosbuvir的非對(duì)映異構(gòu)體,是sofosbuvir的雜質(zhì)。Sofosbuvir(PSI-7977)是HCVRNA復(fù)制的抑制劑,表現(xiàn)出有效的抗丙型肝炎病毒活性。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 分子量:633.56 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
端羧基聚(乳-羥基乙75/25)共聚物(重均分子量...英文名稱: Celiprolol hydrochlorideNFKB激活蛋白抗體包裝250mg
端羧基聚(乳-羥基乙75/25)共聚物(重均分子量...英文名稱: Sodium dodecyl sulfateNLE1蛋白抗體包裝5g
端羧基聚(乳-羥基乙75/25)共聚物(重均分子量...英文名稱: Mianserin hydrochloride磷化一氧化氮合成3(內(nèi)皮型)抗體包裝100g
端羧基聚(乳-羥基乙75/25)共聚物(重均分子量...英文名稱: Daclatasvir;BMS-790052; EBP883磷化一氧化氮合成3(內(nèi)皮型)抗體包裝25g
端羧基聚乳乙共聚物50/50(重均分子量0.5-...英文名稱: Cefmenoxime hydrochloride磷化一氧化氮合成3(內(nèi)皮型)抗體包裝1g
端羧基外消旋聚乳(重均分子量0.5-1.5萬(wàn))英文名稱: Troxipide增食欲A/欲激A抗體包裝5g
端羧基外消旋聚乳(重均分子量1.5-3萬(wàn))英文名稱: Isosakuranetin 7-O-rutinoside增食欲A/欲激A抗體包裝25g
端羧基外消旋聚乳(重均分子量109-150萬(wàn))英文名稱: Naftifine Hydrochloride2'-5'-寡腺苷合成3抗體包裝5g
端羧基外消旋聚乳(重均分子量150-190萬(wàn))英文名稱: Calcium carbonate牙齒發(fā)育相關(guān)蛋白Osr2抗體包裝100g
端羧基外消旋聚乳(重均分子量16-28萬(wàn))英文名稱: Amlodipine mesylate胚胎干關(guān)鍵蛋白190抗體(N端)包裝25g
端羧基外消旋聚乳(重均分子量190-240萬(wàn))英文名稱: Voglibose起始識(shí)別復(fù)合蛋白亞基1抗體包裝5g
端羧基外消旋聚乳(重均分子量28-42萬(wàn))英文名稱: Methylprednisolone hemisuccinate泛特異性蛋白Otubain2抗體包裝1g
端羧基外消旋聚乳(重均分子量3-6萬(wàn))英文名稱: Altretamine精神發(fā)育遲滯相關(guān)蛋白Oligophrenin-1抗體包裝5g
端羧基外消旋聚乳(重均分子量42-57萬(wàn))英文名稱: Metoclopramide末端多聚腺苷2蛋白抗體包裝25g
端羧基外消旋聚乳(重均分子量57-73萬(wàn))英文名稱: Ozagrel Sodium口腔癌高表達(dá)的蛋白1抗體包裝5g
乳桿菌屬Lactobacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:效價(jià)測(cè)定,標(biāo)準(zhǔn)品基質(zhì)金屬蛋白抑制因子2試劑盒補(bǔ)骨脂; Psoralen
粉褐粉孢牛肝菌Tylopilus│chromapes (Frost) A.H. Sm. & Thiers 質(zhì)量規(guī)格:>99%基質(zhì)金屬蛋白9/明膠B試劑盒表小檗堿;Epiberberine
鏈霉菌屬Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:干品Cefquinome>80%,BR基質(zhì)金屬蛋白8/中性粒膠原試劑盒寶藿苷Ⅰ;baohuoside I
HCVRNA復(fù)制抑制劑(Sofosbuvir impurity H)軸突導(dǎo)向因子SEMA6C抗體L-(+)-二乙酯 DIETHYL-L-TARTRATE, (+)-(RG)Human, Mouse
絲/蘇蛋白激2抗體香風(fēng)草甙 DIDYMIN(SH)Human, Mouse, Rat
多重表皮生長(zhǎng)因子樣蛋白4抗體香風(fēng)草甙 DIDYMIN(P)(PLEASE CALL)Human
跨膜蛋白SEMA4B抗體1,9-二脫氧福斯高林 DIDEOXYFORSKOLIN, 1,9-(AS)Human
跨膜蛋白SEMA4F抗體1,9-二脫氧福斯高林 DIDEOXYFORSKOLIN, 1,9-(AS)Human
跨膜蛋白SEMA4G抗體DEMETHYLSIMMONDSIN-2'-FERULATE, 4-(P)Human
軸突導(dǎo)向因子SEMA3E抗體DIDEMETHYLSIMMONDSIN, 4,5-(P)Human
泛相關(guān)修飾蛋白特異性蛋白5抗體二聚環(huán)戊二烯 DICYCLOPENTADIENE(RG)Human
SNAPC3蛋白抗體肌肉硫鹽 DICREATINOL SULFATE(P)Human