以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
商品介紹:
T-00127_HEV1是一個(gè)phosphatidylinositol4-kinase III beta(PI4KB)抑制劑,其IC50值為60nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):900874-91-1 純度:99.97% 分子量:411.5 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
端羧基右旋聚乳(重均分子量73-102萬(wàn))英文名稱(chēng): Emtricitabine鳥(niǎo)脫羧抗3抗體包裝10mg
端羧基右旋聚乳(重均分子量9-17萬(wàn))英文名稱(chēng): Creatinine食欲前體蛋白OX抗體包裝25ml
端羧基左旋聚乳(重均分子量0.3-1.5萬(wàn))英文名稱(chēng): Diclofenac Potassium纖維源性蛋白包裝50ml
端羧基左旋聚乳(重均分子量1.5-3萬(wàn))英文名稱(chēng): Exemestane鳥(niǎo)酰轉(zhuǎn)移抗體包裝100g
端羧基左旋聚乳(重均分子量102-137萬(wàn))英文名稱(chēng): Trimetazidine HydrochlorideOS-9蛋白抗體包裝25g
端羧基左旋聚乳(重均分子量137-170萬(wàn))英文名稱(chēng): Ziprasidone mesilate尾部結(jié)構(gòu)蛋白抗體包裝25g
端羧基左旋聚乳(重均分子量17-26萬(wàn))英文名稱(chēng): Melitracen hydrochloride磷化尾部結(jié)構(gòu)蛋白抗體包裝5g
端羧基左旋聚乳(重均分子量170-206萬(wàn))英文名稱(chēng): Mizolastine8-羥基鳥(niǎo)嘌呤DNA糖基化包裝100g
端羧基左旋聚乳(重均分子量206-288萬(wàn))英文名稱(chēng): Desloratadine嗅覺(jué)受體家族10亞基J3抗體包裝25g
端羧基左旋聚乳(重均分子量26-36萬(wàn))英文名稱(chēng): Mometasone Furoate嗅覺(jué)受體家族2亞基4抗體包裝1g
端羧基左旋聚乳(重均分子量3-5.5萬(wàn))英文名稱(chēng): Penehyclidine Hydrochloride嗅覺(jué)受體家族5亞基3抗體包裝250mg
端羧基左旋聚乳(重均分子量36-48萬(wàn))英文名稱(chēng): 3-quinuclidinol外致密纖維蛋白3B抗體包裝100g
端羧基左旋聚乳(重均分子量48-73萬(wàn))英文名稱(chēng): Pravastatin1,1,3,3-tetramethylbutylamine骨鈣蛋白/骨鈣抗體包裝25g
端羧基左旋聚乳(重均分子量5.5-9萬(wàn))英文名稱(chēng): Itopride Hydrochloride固生蛋白3抗體包裝1g
端羧基左旋聚乳(重均分子量73-102萬(wàn))英文名稱(chēng): Fosinopril sodium腫瘤/抗原135抗體包裝25g
弧菌Vibrio│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR基質(zhì)金屬蛋白3/基質(zhì)裂解1試劑盒別隱品堿;Allocryptopine
酵母菌Saccharomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品基質(zhì)金屬蛋白25試劑盒3-表中國(guó)臺(tái)灣三尖杉?jí)A;3-Epiwilso
: ATCC19424=NCTC8375資源名稱(chēng): 淋病奈瑟菌 質(zhì)量規(guī)格:>97%基質(zhì)金屬蛋白2/明膠A試劑盒半枝蓮堿;Scutebarbatine
PI4KB抑制劑(T-00127_HEV1)軸突相關(guān)粘附分子抗體蛋白二硫化物異構(gòu)A2(PDIA2)檢測(cè)試劑盒PDIA2 ELISA Kit
卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白CHCHD1抗體蛋白Z(PROZ)檢測(cè)試劑盒PROZ ELISA Kit
ATP依賴(lài)的解旋CHD3抗體蛋白C(PROC)檢測(cè)試劑盒PROC ELISA Kit
碳酐7抗體蛋腺苷轉(zhuǎn)移Ⅰα(MAT1α)檢測(cè)試劑盒MAT1α ELISA Kit
膠原蛋白和鈣結(jié)合表皮生長(zhǎng)因子結(jié)構(gòu)域1抗體彈性蛋白微原纖維界面因子2(EMILIN2)檢測(cè)試劑盒EMILIN2 ELISA Kit
卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白102B抗體彈性蛋白4(ELA4)檢測(cè)試劑盒ELA4 ELISA Kit
卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白16抗體彈性蛋白(ELN)檢測(cè)試劑盒ELN ELISA Kit
色B還原1抗體膽囊收縮八肽(CCK8)檢測(cè)試劑盒CCK8 ELISA Kit
2號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框76抗體膽囊收縮B受體(CCKBR)檢測(cè)試劑盒CCKBR ELISA Kit