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使用高效液相色譜儀如何檢測飲料成分?

閱讀:86          發(fā)布時間:2025-8-12
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使用高效液相色譜儀如何檢測飲料成分?

使用高效液相色譜儀(HPLC)檢測飲料成分,需結合飲料的基質特性(如含糖量、酸度、是否含添加劑等)選擇合適的前處理方法和色譜條件,以下是通用流程:
一、檢測前準備
  1. 目標成分確定

明確需檢測的物質,常見包括:
  • 食品添加劑(防腐劑如苯甲酸、山梨酸;甜味劑如甜蜜素、阿斯巴甜;色素如檸檬黃、日落黃);

  • 營養(yǎng)成分(維生素 C、茶多酚等);

  • 污染物(農藥殘留、真菌毒素等,需更高檢測精度)。

  1. 試劑與儀器準備

  • 標準品:購買目標成分的標準溶液,用于繪制校準曲線;

  • 溶劑:色譜純甲醇、乙腈(流動相),超純水(需經(jīng) 0.22μm 濾膜過濾),磷酸、乙酸銨等(調節(jié)流動相 pH);

  • 前處理工具:離心機、0.45μm 針頭濾膜(過濾樣品)、固相萃取柱(復雜基質凈化)。

二、樣品前處理
  1. 簡單基質飲料(如礦泉水、清茶)

  • 取 10mL 樣品,直接經(jīng) 0.45μm 濾膜過濾,去除顆粒物,濾液作為待測液。若樣品含少量糖分,可加入少量甲醇沉淀蛋白(比例 1:1),渦旋后離心(4000r/min,10min),取上清液過濾。

  1. 復雜基質飲料(如果汁、碳酸飲料、乳飲料)

  • 碳酸飲料:先超聲脫氣 10min,去除二氧化碳,避免氣泡影響色譜柱和檢測器;

  • 果汁 / 乳飲料:取 5mL 樣品,加入 10mL 甲醇(或乙腈),渦旋 3min 沉淀糖類和蛋白質,4℃靜置 15min 后離心(5000r/min,15min),取上清液用超純水稀釋 5 倍,經(jīng) 0.22μm 濾膜過濾;

  • 高糖飲料(如可樂):采用固相萃取柱凈化,先用甲醇和水活化柱子,上樣后用 5% 甲醇水溶液淋洗,再用 80% 甲醇洗脫目標成分,洗脫液經(jīng)氮吹濃縮后定容至 1mL,過濾待測。

三、色譜條件設置
  1. 色譜柱選擇

  • 檢測極性成分(如維生素 C、防腐劑):常用 C18 反相柱(250mm×4.6mm,5μm),若保留較弱可選擇極性改性 C18 柱;

  • 檢測離子型成分(如甜蜜素、有機酸):可采用離子交換柱或添加離子對試劑(如庚烷磺酸鈉)的反相系統(tǒng)。

  1. 流動相配置

  • 示例(檢測防腐劑和甜味劑):

流動相 A 為 0.02mol/L 乙酸銨水溶液(pH=4.0),流動相 B 為甲醇;
梯度洗脫:0-5min,10% B;5-15min,10%-30% B;15-20min,30% B,流速 1.0mL/min。
  1. 檢測器與柱溫

  • 紫外檢測器(UV):適用于有紫外吸收的成分(如苯甲酸 λ=230nm,山梨酸 λ=230nm,色素 λ=400-600nm);

  • 示差折光檢測器(RID):用于無紫外吸收的成分(如糖類),但靈敏度較低;

  • 柱溫:30-40℃(提高分離度,減少保留時間波動)。

四、檢測與結果分析
  1. 標準曲線繪制

將目標成分標準品用流動相稀釋成 5-6 個濃度梯度(如 0.1、0.5、1、5、10μg/mL),依次進樣(進樣量 10-20μL),以峰面積為縱坐標、濃度為橫坐標繪制標準曲線,計算回歸方程(R2 需≥0.999)。
  1. 樣品檢測

取處理后的待測液進樣,記錄色譜峰的保留時間和峰面積,根據(jù)標準曲線計算樣品中目標成分的濃度。若峰形不佳(如拖尾、重疊),可調整流動相比例或 pH 值優(yōu)化分離效果。
  1. 質量控制

  • 每批樣品做空白對照(超純水或溶劑),排除污染干擾;

  • 平行樣相對偏差需≤5%,確保結果重復性。

通過以上步驟,可實現(xiàn)飲料中多種成分的定性和定量分析,實際操作中需根據(jù)具體檢測目標調整前處理和色譜條件,必要時參考國家標準(如 GB 5009 系列)中的方法參數(shù)。

教你如何選擇高效液相色譜儀?





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