摘 要：

細(xì)菌菌種保藏是微生物學(xué)的一項(xiàng)基本實(shí)驗(yàn)技能。常用的菌種保藏方法較多，濾紙保藏法由于其較液氮法、冷凍干燥法等簡(jiǎn)便，不需要特殊設(shè)備，因此是比較常用的一種。濾紙保藏法包括抽真空法和無(wú)需抽真空法。當(dāng)需要復(fù)蘇使用菌種時(shí)，直接取出1-2片濾紙片放入適宜的培養(yǎng)基內(nèi)培養(yǎng)即可。該法尤其適合一些對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高的細(xì)菌，保藏時(shí)間可達(dá)2年以上。

關(guān)鍵詞： 凍干 , 培養(yǎng)基 , 菌種保藏 , 菌種復(fù)蘇

在微生物實(shí)驗(yàn)中，細(xì)菌菌種保藏是一項(xiàng)基本的實(shí)驗(yàn)技能。常用的菌種保藏方法比較多，濾紙保藏法由于其較液氮法、冷凍干燥法等簡(jiǎn)便，也不需要特殊設(shè)備，因此是比較常用的一種。下面介紹用濾紙片法保藏菌種的方法。

一、濾紙片的準(zhǔn)備

用打孔器將濾紙制成直徑約3mm的圓形小紙片，放入普通玻璃小瓶中，121°C高壓滅菌30分鐘后備用。

二、菌種的準(zhǔn)備

將需要保存的菌種，在適宜的斜面培養(yǎng)基或平板培養(yǎng)基上培養(yǎng)，使其充分生長(zhǎng)。

三、菌種保存

（一）抽真空方法

（1）取滅菌脫脂牛乳1-2ml滴加在滅菌培養(yǎng)皿或試管內(nèi)，挑取數(shù)環(huán)菌苔在牛乳內(nèi)混勻，制成濃懸液。

（2）用滅菌鑷子夾住高壓滅菌后的濾紙片浸入菌懸液內(nèi)，使其自然吸飽，小心放入滅菌后的菌種保存玻璃瓶?jī)?nèi)，每瓶至少放置10片，然后蓋上瓶蓋（注意留有小縫隙，不要蓋緊）。

（3）在玻璃瓶外壁上注明菌種編號(hào)、種類、名稱、保存時(shí)間等信息。

（4）將玻璃瓶放入內(nèi)有五氧化二磷作吸水劑的干燥器中，用真空泵抽氣至干（如果沒(méi)有干燥器，也可直接抽氣至干）。

（5）將干燥后的裝有菌片的玻璃瓶放置于-20°C及以下低溫冰箱冷凍保存。

上述濾紙片保存法需要抽真空，如果實(shí)驗(yàn)室不具備抽真空的條件，用如下方法。

（二）無(wú)需抽真空方法

（1）用無(wú)菌小鑷子夾住濾紙片，每片在細(xì)菌平板上刮取菌苔，或至少刮取3-5個(gè)單菌落，然后將濾紙片放入菌種保存玻璃瓶?jī)?nèi)，每瓶至少放置10片，然后直接蓋緊瓶蓋。

（2）在玻璃瓶外壁上注明菌種編號(hào)、種類、名稱、保存時(shí)間等信息。

（3）將干燥后的裝有菌片的玻璃瓶放置于-20°C及以下低溫冰箱冷凍保存。

四、菌種復(fù)蘇

當(dāng)需要復(fù)蘇使用菌種時(shí)，從菌種保存玻璃瓶中取出1-2片濾紙片，用少量生理鹽水浸泡后，劃線接種于適宜的固體培養(yǎng)上；或直接將濾紙片放入適宜的液體培養(yǎng)基內(nèi)，置培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

濾紙保藏法可應(yīng)用于細(xì)菌、酵母菌、絲狀真菌等的保藏，該法尤其適合一些對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求不高的菌種，保藏時(shí)間可達(dá)2年以上。濾紙保藏法可廣泛應(yīng)用于大、中、小等各類微生物實(shí)驗(yàn)室。