核酸定量——dsDNA/ RNA定量解決方案

關(guān)于核酸檢測(cè)，方法還是挺多的，比如常用的分光光度法，和熒光染料法。

一、分光光度法

此法不具有選擇性，無(wú)法區(qū)分DNA、RNA或蛋白質(zhì)。檢測(cè)數(shù)值J易受到其他污染物(如游離核苷酸、鹽和有機(jī)化合物)和堿基組成差異的影響。

二、熒光染料法

也是今天要重點(diǎn)介紹的，有哪些熒光染料，可以特異地與雙鏈DNA、單鏈DNA、RNA相結(jié)合，并在特定波長(zhǎng)光源的激發(fā)下，發(fā)出熒光，并且不會(huì)檢測(cè)到樣本中可能存在的其他雜質(zhì)分子，熒光強(qiáng)度與樣品中的靶分子濃度相對(duì)應(yīng)呢？

一起來(lái)看看吧：

首先，是 DNA和RNA定量試劑

Helixyte Green dsDNA定量試劑（17597）和StrandBrite Green RNA定量試劑（17611）分別對(duì)雙鏈DNA和單鏈RNA進(jìn)行了優(yōu)化。它們對(duì)核酸有很高的親和力，對(duì)結(jié)合核酸有J大的熒光增強(qiáng)作用，使得在幾分鐘內(nèi)直接檢測(cè)復(fù)雜溶液中微量核酸成為可能，而且一般不會(huì)受到其他生物分子的干擾。

小牛胸腺DNA中使用Helixyte 綠色和PicoGreen進(jìn)行DNA定量。由圖看出Helixyte 綠色和PicoGreen 具有幾乎相同的性能。

Helixyte Green是一種出色的核酸定量試劑，與dsDNA結(jié)合后可顯著增強(qiáng)熒光。其優(yōu)勢(shì)如下：

高靈敏度：Helixyte Green和StrandBrite Green的靈敏度比UV吸收率測(cè)定法高10,000倍

選擇性高：與紫外吸收的測(cè)量不同，這些檢測(cè)不受蛋白質(zhì)，游離核苷酸或非常短的寡核苷酸的影響，從而使完整的寡核苷酸和核酸的定量在復(fù)雜混合物（例如血清或全血）中更加準(zhǔn)確。

操作簡(jiǎn)單：這些檢測(cè)方法非常簡(jiǎn)單，不需要分離步驟，因此非常適合自動(dòng)化，高通量篩選

檢范圍廣：對(duì)于Helixyte Green的檢測(cè)，定量在四個(gè)數(shù)量級(jí)內(nèi)都是準(zhǔn)確的?；?span style="font-family: Calibri;">StrandBrite 的熒光檢測(cè)在三個(gè)數(shù)量級(jí)上都是準(zhǔn)確的。

1、dsDNA定量

Hoechst 33258,超級(jí)純，#AAT-17520

Hoechst染料是一類在顯微觀察中標(biāo)記DNA的熒光染料。因?yàn)檫@類熒光染料能標(biāo)記DNA，所以它們也經(jīng)常用于細(xì)胞核和線粒體的顯像觀察。這類染料中兩個(gè)相關(guān)的染料Hoechst 33258和Hoechst 33342經(jīng)常使用。這兩種染料都在紫外光下350nm處被激發(fā)，都在461nm處大發(fā)射光附近發(fā)射藍(lán)/青色熒光。Hoechst染料可以用于活細(xì)胞或者固定化細(xì)胞，并且經(jīng)常用來(lái)代替其它核酸染料如DAPI。這兩種染料關(guān)鍵的不同點(diǎn)在于，與DAPI相比，Hoechst 33342加有乙基，這使它具有更強(qiáng)的親脂性，因此能更好的透過(guò)完整的細(xì)胞膜。在一些實(shí)驗(yàn)中，Hoechst 33258的滲透性明顯比Hoechst 33342要弱些。這些染料也可以用來(lái)檢測(cè)樣品中的DNA含量，通過(guò)繪制發(fā)射光強(qiáng)度與DNA含量的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.RNA定量

StrandBrite 綠色RNA定量試劑,200X DMSO 溶液，#AAT-17610

檢測(cè)和定量小量RNA在各種分子生物學(xué)應(yīng)用中尤其重要，比如定量體外RNA轉(zhuǎn)錄及測(cè)量RNA濃度在準(zhǔn)備進(jìn)行Northern印記雜交，S1p核酸酶分析，RNA酶保護(hù)分析，cDNA文庫(kù)制備，逆轉(zhuǎn)錄PCR及DD-PCR。常用的是測(cè)定核酸濃度技術(shù)，在260nm處測(cè)定吸光度?；谖舛鹊姆椒ㄖ饕娜秉c(diǎn)是來(lái)自蛋白、游離核苷酸及其他紫外線吸收化合物的干擾。利用靈敏的帶熒光的核酸染色劑可減輕這種干擾狀況。StrandBrite RNA定量試劑是一種可在溶液中對(duì)RNA進(jìn)行定量檢測(cè)的超靈敏的熒光核酸染色劑。StrandBriteRNA定量試劑可檢測(cè)出濃度低至 5 ng/mL的RNA通過(guò)熒光酶標(biāo)儀或熒光光度計(jì)。