熒光染料研究：PerCP-Cy5.5串聯(lián)染料方案

常見流式抗體熒光染料介紹：

1) 藻紅蛋白（phycoerythrin，PE）：PE是從紅藻中分離純化獲得的一種常見染料，經(jīng)激光激發(fā)后發(fā)出橙黃色熒光，zui大發(fā)射波長為575 nm。PE具有吸光性能好和光量子產(chǎn)率高的特點(diǎn)，可用于標(biāo)記表達(dá)水平較低的蛋白。在流式細(xì)胞術(shù)檢測中，PE標(biāo)記的抗體適用于所有配備488 nm氬離子激光器的流式細(xì)胞儀。

2) PE-Cy5：PE-Cy5是一種復(fù)合染料，屬于藻紅蛋白偶聯(lián)物，在此類復(fù)合染料中，激發(fā)能量可從PE傳遞到Cy5上，zui大發(fā)射波長為667 nm。由于PE-Cy5與FITC、PE在光譜上重疊范圍較少，熒光干擾少，因此實(shí)驗(yàn)中常將PE-Cy5與FITC、PE搭配使用。需注意，PE-Cy5不適合與APC搭配使用，兩者熒光重疊大。

3)PE-Cy5.5：PE-Cy5.5也是一種復(fù)合染料，能量從PE傳遞到Cy5.5上，zui大發(fā)射波長為694 nm。同PE-Cy5不一樣，PE-Cy5.5與FITC、PE、APC間熒光干擾小，可搭配使用，且其熒光強(qiáng)度要優(yōu)于PE-Cy5。

4) PE-Cy7：復(fù)合染料，zui大發(fā)射波長為785 nm。PE-Cy7與FITC無光譜重疊，與APC重疊也較少，因此其可與FITC、PE、APC搭配使用。在實(shí)驗(yàn)中需要注意，PE-Cy7的光淬滅性很強(qiáng)，需要避光環(huán)境。

5) PerCP-Cy5.5：復(fù)合染料，zui大發(fā)射波長為695 nm。PerCP-Cy5.5光量子產(chǎn)率高，可用于表達(dá)水平較低物質(zhì)的檢測，與PerCP-Cy5.5相反，PerCP的光量子產(chǎn)率較低，適用于表達(dá)水平較高物質(zhì)的檢測，在雙激光管儀器上與APC共同檢測時(shí)，需要做補(bǔ)償調(diào)節(jié)，但比PerCP補(bǔ)償少。

6) PI/7-AAD：碘化丙啶（propidium iodide，PI）和7-AAD（7-amino-actinomycin D）的zui大發(fā)射波長分別為617 nm和647 nm，是常見的熒光染料，常用于細(xì)胞凋亡檢測，可用于鑒別死、活細(xì)胞。在大部分流式細(xì)胞儀上，PI在FL2或FL3通道檢測，7-AAD在FL3通道檢測。7-AAD同PI 有著相似的熒光特性，但其發(fā)射波譜較PI窄，對其他檢測通道的干擾更小，在多色熒光分析中是PI的 替代品。

7) 別藻青蛋白（allophycocyanin，APC）：APCzui大發(fā)射波長為660 nm，其標(biāo)記的抗體適用于所有配備氦氖激光器的流式細(xì)胞儀，檢測通道一般是FL4通道。FITC、PE和APC搭配是經(jīng)典3色搭配。

8) Cy5：Cy5屬于小分子染料，其zui大發(fā)射波長為670 nm，其標(biāo)記的抗體適用于所有配備633 nm氬離子激光器的流式細(xì)胞儀，檢測通道一般是FL4通道。除流式細(xì)胞術(shù)外，Cy5同樣適用于傳統(tǒng)的熒光顯微鏡技術(shù)。需注意的是，Cy5與單核細(xì)胞和粒細(xì)胞的非特異性結(jié)合多，實(shí)驗(yàn)結(jié)果容易出現(xiàn)假陽性。

9) 異硫氰酸熒光素（fluorescein isothiocyanate，FITC）：FITC是應(yīng)用 廣泛的一種熒光素，經(jīng)激光激發(fā)后發(fā)出明亮的黃綠色熒光，zui大發(fā)射波長為525 nm。FITC的熒光強(qiáng)度受PH影響較大，常隨著PH的降低而減弱，因此，在使用FITC時(shí)需格外注意溶液的酸堿度。

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