實用！西尼羅病毒胞膜蛋白ELISA檢測試劑盒操作手冊

病原學西尼羅病毒屬于黃病毒科黃病毒屬，與乙型腦炎、圣路易腦炎、黃熱病、登革熱、丙型肝炎等病毒同屬。有囊膜，單鏈線形核糖核酸，RNA為正鏈，約有10000～11000個堿基對，具有感染性。電鏡下該病毒呈中等大小，直徑21nm～60nm,圓形顆粒，對有機溶劑，紫外線敏感。

西尼羅病毒是一種基因組約為11kb的單股正鏈RNA病毒。該病毒基因組5’端為結構蛋白區(qū)，3’端為非編碼區(qū)。這種RNA可 直接作為mRNA而翻譯成多肽，并在病毒和細胞內(nèi)蛋白酶的共同作用下被切割成3種結構蛋白（衣殼蛋白C、胞膜蛋白E和膜蛋白prM/M）和7種非結構蛋白（NS1、NS2a、NS2b、NS3、NS4a、NS4b和NS5）。其中E蛋白在西尼羅病毒的生命周期中起著重要作用，也是產(chǎn)生中和抗體的主要病毒蛋白。由于E蛋白可以介導病毒附著以及病毒和宿主的融合，并且大多數(shù)中和抗體是針對E蛋白上的抗原表位產(chǎn)生的，因此E蛋白是目前西尼羅病毒疫苗開發(fā)的最佳研究靶點。

西尼羅病毒最初是1937年從烏干達西尼羅地區(qū)一名發(fā)熱的婦女血液中分離出來而被發(fā)現(xiàn)，因此得名為西尼羅病毒。西尼羅河病毒是一種腦炎病毒，以鳥類為主要的貯存宿主，馬、蚊子和人都可以是它的傳染宿主。人類感染西尼羅病毒后并不互相傳播,通常為隱性感染.潛伏期為3～15天.目前還沒有針對西尼羅河病毒的特丨效藥，保護人類的相關疫苗也尚未問世。預防西尼羅病毒的方法是避免被蚊子叮咬，外出時最好穿長袖衣服和褲子，并使用驅蚊劑和防蚊貼。

艾美捷丨Cell Biolabs的 西尼羅病毒胞膜蛋白ELISA檢測試劑盒，方便快捷，助力科研。檢測原理如下：

抗WNV E蛋白的抗體被吸附到微量滴定板上。樣品或標準品中存在的WNV E蛋白與吸附在平板上的抗體特異性結合；添加生物素標記的抗WNV E蛋白抗體，與捕獲的抗原WNV E蛋白結合。

在孵育和洗滌步驟之后，加入HRP偶聯(lián)的鏈霉親和素，與生物素標記的抗WNV E蛋白抗體結合。在洗滌步驟中去除未結合的鏈霉親和素，將與HRP反應的底物溶液添加到孔中。

有色產(chǎn)物的形成與樣品中存在的WNV E蛋白的量成比例。加入酸終止反應，并在450nm處測量吸光度。用標準品WNV E蛋白制備標準曲線，然后確定樣品WNV E蛋白濃度。

西尼羅病毒胞膜蛋白ELISA檢測試劑盒樣品的制備和滅活：

1.（可選）根據(jù)需要在培養(yǎng)基中稀釋病毒上清液。對于未知樣品，可以為每個樣品推薦幾種稀釋液。包括培養(yǎng)基作為陰性對照。

2.將225µL每個樣品轉移到含有25µL裂解溶液的微量離心管中。

3.在室溫下培養(yǎng)60分鐘。：

西尼羅病毒胞膜蛋白ELISA檢測試劑盒化驗方案：

1.向抗E蛋白抗體中添加100µL WNV E蛋白未知樣品或標準品鍍膜板。每個WNV E蛋白未知樣品、標準品和空白品應在實驗室進行分析復制

2.在室溫下在軌道振動篩上培養(yǎng)1小時。

3.用250µL 1X清洗緩沖液清洗微孔板條3次，每孔*抽吸在每次清洗之間。最后一次清洗后，清空微孔，并將微孔條輕敲在吸水墊或吸水墊上用紙巾去除多余的1X洗滌緩沖液。

4.向每個孔中添加100µL稀釋的生物素化抗WNV E蛋白抗體。孵育在軌道振動篩上室溫下放置1小時。

5.根據(jù)上述步驟3，清洗帶槽3次。

6.向每個孔中添加100µL稀釋的鏈霉親和素酶結合物。在室內(nèi)孵化在軌道振動篩上加熱1小時。

7.根據(jù)上述步驟3，清洗帶槽3次。立即進行下一步。

艾美捷科技是Cell Biolabs的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質的產(chǎn)品與服務。