細(xì)胞凋亡研究丨艾美捷 Annexin V染色方案

Annexin V是一種檢測細(xì)胞凋亡的試劑，在正常細(xì)胞中，磷脂酰絲氨酸只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，細(xì)胞發(fā)生凋亡早期，膜磷脂酰絲氨酸（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。Annexin V作為一種磷脂結(jié)合蛋白，與磷脂酰絲氨酸有高度親和力，它通過細(xì)胞外側(cè)暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此Annexin V是檢測細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)。

（圖片來自網(wǎng)絡(luò)）

艾美捷/Annexin V 是一種在大腸桿菌中表達(dá)的重組蛋白。細(xì)胞結(jié)構(gòu)的一些變化在細(xì)胞凋亡過程中發(fā)生。一個主要的變化是膜磷脂不對稱性的喪失，伴隨著磷脂酰絲氨酸的移位（PS）從磷脂雙層的內(nèi)小葉到外表面。

艾美捷/Annexin V建議的染色方案：

1.在冷PBS中清洗細(xì)胞兩次

2.在冷1X ApoScreen®中重新使用電池膜聯(lián)蛋白結(jié)合緩沖液（SB目錄號10045-01）濃度為1 x 106細(xì)胞/mL

3.加100mL細(xì)胞懸液至5mL聚苯乙烯圓底管

4.加10m共軛ApoScreen®Annexin V

5.輕輕旋轉(zhuǎn)每根試管，在2-8°C溫度下培養(yǎng)15分鐘，并避光

6.在不清洗的情況下，添加~380m冷1X ApoScreen®Annexin 結(jié)合緩沖液到每根管

7.加10mApoScreen®的L7-氨基放丨線丨菌素D（7-AAD；SB分類號10042-01）或ApoScreen®碘化丙啶（PI；SB類別號。

艾美捷/Annexin V儲存方式：

1.純化的（UNLB）ApoScreen®Annexin V 以0.1mg純化的重組蛋白形式從PBS中凍干。儲存材料在重構(gòu)前的-20°C溫度下。用1.0毫升的dH2O重新配制。將再造材料儲存在2-8°C的溫度下。

2.熒光素（FITC）、生物素（BIOT）和菁5（CY5）ApoScreen®附錄V結(jié)合物在1.0毫升的溶液中作為100次試驗提供ApoScreen®Annexin V 結(jié)合緩沖液。在2-8°C下儲存。

3.R-藻紅蛋白（PE）和別藻藍(lán)蛋白（APC）ApoScreen®在1.0毫升PBS/NaN3中，以100次試驗的形式提供膜Annexin V結(jié)合物和穩(wěn)定劑。在2-8°C下儲存。不要冷凍！

4.保護(hù)熒光色素結(jié)合物不受光照。如果按照指示儲存，試劑在標(biāo)簽上顯示的時間內(nèi)是穩(wěn)定的。