Rockland 艾美捷NFkB p65抗體說明書

NFkB最初被鑒定為一種與B細(xì)胞中的免疫球蛋白κ輕鏈增強(qiáng)子結(jié)合的因子。隨后在非B細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，它以非活性細(xì)胞質(zhì)形式存在，由與IkB結(jié)合的NFkB組成。NFkB最初被鑒定為一種異二聚體DNA結(jié)合蛋白復(fù)合物，由p65（RelA）和p50（NFKB1）亞基組成。其他確定的亞單位包括p52（NFKB2）、c-Rel和RelB。p65、cRel和RelB亞單位負(fù)責(zé)反式激活。p50和p52亞單位具有DNA結(jié)合活性，但反式激活能力有限。據(jù)報(bào)道，p52與NFkB亞單位p65形成轉(zhuǎn)錄活性異二聚體，類似于p50/p65異二聚體。細(xì)胞中也可能存在低水平的p52和p50同源二聚體。p52/p65和p50/p65的異二聚體由IkB-a在細(xì)胞質(zhì)中的物理失活調(diào)節(jié)。IkB-a與p65亞單位結(jié)合，阻止核定位和DNA結(jié)合。IkB-a結(jié)合掩蓋了NFkB核定位信號(hào)（NLS）。廣泛的外部刺激導(dǎo)致NFkB的激活，并引發(fā)信號(hào)級(jí)聯(lián)，最終聚集在IkB激酶（IKK）復(fù)合物上?；罨?span style="font-family: Calibri;">IKK特異性地直接磷酸化IkB-a，該磷酸化事件針對(duì)IkB-a進(jìn)行降解。因此，NFkB NLS被發(fā)現(xiàn)，核易位發(fā)生。

Rockland/艾美捷 該抗體從全兔血清中純化，所述全兔血清通過使用馬來酰亞胺重復(fù)免疫NFkB p65肽制備，所述NFkB p65肽對(duì)應(yīng)于與KLH結(jié)合的人類蛋白質(zhì)的NLS。將半胱氨酸殘基添加到氨基末端以促進(jìn)偶聯(lián)。

Rockland/艾美捷 抗NFKB p65抗體已在ELISA、ICC、WB和IF中檢測。NFkB凝膠位移分析在20µl反應(yīng)中組裝，反應(yīng)中含有0.28 pmoles NFkB低聚物，在10mM Tris（pH 7.6）、50 mM NaCl、0.5 mM EDTA、1.0 mM DTT和10%甘油中。一些程序規(guī)定添加0.05%的NP-40。當(dāng)使用純化蛋白時(shí)，250-300 ng應(yīng)足以產(chǎn)生凝膠移位復(fù)合物，而使用10µg HeLa核提取物。然后將凝膠轉(zhuǎn)移反應(yīng)在室溫下培養(yǎng)30分鐘。配合物在三甘氨酸丙烯酰胺凝膠上溶解。含有溴酚藍(lán)和二甲苯氰醇的負(fù)載染料只能添加到陰性對(duì)照反應(yīng)中，因?yàn)檫@些染料會(huì)增加NFkB絡(luò)合物的解離。當(dāng)使用HeLa核提取物作為結(jié)合蛋白的來源時(shí)，預(yù)計(jì)會(huì)出現(xiàn)兩種序列特異性凝膠位移復(fù)合物，包括p50/p50同二聚體和p50/p65異二聚體。對(duì)于表達(dá)p52、p50和p65的細(xì)胞，可以觀察到多達(dá)四種序列特異性凝膠位移復(fù)合物（p52/p52、p50/p50、p52/p65、p50/p65），如果存在高水平的p65，也可能檢測不到p65/p65同源二聚體。已觀察到以下試劑可增強(qiáng)體外NFkB結(jié)合：毫摩爾量的GTP和ATP、精胺、亞精胺、鋇或鈣離子，以及µM量的Co+3（NH3）6。

這種親和純化抗體針對(duì)人類p65的核定位序列（NLS）NLS，可用于確定其在各種分析中的存在。識(shí)別的表位與NFkB異二聚體p65亞基的NLS重疊。因此，抗體選擇性地結(jié)合NFkB的激活形式?？?span style="font-family: Calibri;">NFkB p65 NLS可能與其他蛋白質(zhì)發(fā)生非特異性反應(yīng)。

Rockland/艾美捷Mcl-1抗體基本參數(shù)：

基因名稱：RELA

測試應(yīng)用程序：ELISA； IF; WB

目標(biāo)物種：人類

已知交叉反應(yīng)性：人類

寄主種類：兔子

克隆性：多克隆

格式：IgG

免疫原類型：肽

物理狀態(tài)：液體（無菌過濾）

裝運(yùn)條件：干冰

Rockland 相關(guān)研究方案：

重組單鏈抗體抗人CD45抗體  400-301-MR2

重組抗CD20 Fab抗體  400-001-MT2

重組DIG（DIG45）抗體  400-001-MG2

重組抗VEGF RTH258單鏈抗體  400-001-MT5

重組GST抗體  400-001-MR7

重組RFP抗體  400-001-MS3

Rockland研究領(lǐng)域包含高質(zhì)量的抗體——載脂蛋白、細(xì)胞周期/凋亡、細(xì)胞因子、細(xì)胞信號(hào)蛋白、酶類、細(xì)胞外基質(zhì)、轉(zhuǎn)錄因子(NFkB)和泛素（Ubiquitin）等識(shí)別抗體，應(yīng)用范圍包括Western blot、免疫組化、免疫熒光和ELISA等，十分廣泛。

艾美捷科技是Rockland的中國代理商，為科研工作者提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)。