熒光法焦磷酸檢測試劑盒的制備和準備工作方案

焦磷酸鹽 (PPi) 是通過許多生化反應(yīng)產(chǎn)生的，例如 ATP 水解、DNA 和 RNA 聚合、腺苷酸環(huán)化酶形成環(huán)狀 AMP 以及脂肪酸的酶促活化以形成其輔丨酶 A 酯。艾美捷 PhosphoWroks™ 焦磷酸鹽檢測試劑盒為測量焦磷酸鹽提供了可靠的分光光度法。

艾美捷熒光法焦磷酸檢測試劑盒使用專有的熒光焦磷酸鹽傳感器，其熒光強度與焦磷酸鹽濃度成正比。與酶偶聯(lián)焦磷酸鹽方法相比，檢測方法更容易、更可靠，后者需要至少兩種酶來檢測焦磷酸鹽。該試劑盒提供了測定焦磷酸鹽的所有基本成分。該試劑盒已成功用于高通量篩選 (HTS)。

艾美捷熒光法焦磷酸檢測試劑盒熒光酶標儀：

勵磁 316 納米

排放 456 納米

隔斷 420 納米

推薦板 純黑色

艾美捷熒光法焦磷酸檢測試劑盒組件：

組分 A：檢測緩沖液 1 瓶（25 毫升）

組件 B：PPi 傳感器 1小瓶（凍干粉）

組分 C：焦磷酸鹽標準品 1 瓶（1 毫升，50 毫米）

組分 D：二甲基亞砜 1 瓶 (200 µL)

標準溶液的制備：

焦磷酸鹽標準品

將 50 μL 的 1 mM 焦磷酸鹽標準溶液加入 450 μL 的 ddH2O 或 50 mM Hepes 緩沖液中，以獲得 100 μM 焦磷酸鹽標準溶液 (PS7)。取 100 μM 焦磷酸鹽標準溶液并在 ddH2O 或 50 mM Hepes 緩沖液中進行 1:3 連續(xù)稀釋，以獲得連續(xù)稀釋的焦磷酸鹽標準溶液 (PS6 - PS1)。

準備工作解決方案：

將 25 μL 的 200X PPi 傳感器原液加入 5 mL 的檢測緩沖液（組分 A）中，并充分混合以制成 PPi 工作溶液。

注意     由于該檢測對 PPi 的高靈敏度，使用不含 PPi 的實驗室器具和試劑非常重要。DTT ≥ 1 mM 會增加背景，MgCl 2 ≥ 2 mM 會降低響應(yīng)。

艾美捷熒光法焦磷酸檢測試劑盒示例：

圖：使用熒光酶標儀在純黑色 96 孔板中使用 PhosphoWorks™ 熒光焦磷酸鹽檢測試劑盒測量焦磷酸鹽、ATP 和磷酸鹽劑量反應(yīng)。