肌動(dòng)蛋白（牛心臟 muscle）生物活性測(cè)定

艾美捷肌動(dòng)蛋白（牛心臟 muscle）采用Pardee和Spudich法從牛心肌中純化肌動(dòng)蛋白。牛心臟肌動(dòng)蛋白由84%的α心臟肌動(dòng)蛋白和16%的α骨骼肌動(dòng)蛋白亞型組成，分子量約為43 kDa。牛心臟肌動(dòng)蛋白純度大于99%，以白色凍干粉末的形式提供。

艾美捷肌動(dòng)蛋白（牛心臟 muscle）存儲(chǔ)和重建：

短暫離心以收集管底部的產(chǎn)品。凍干蛋白質(zhì)在4°C條件下干燥至<10%濕度時(shí)，可穩(wěn)定儲(chǔ)存6個(gè)月。應(yīng)使用100µl蒸餾水將蛋白質(zhì)重組至10 mg/ml。然后將蛋白質(zhì)置于以下緩沖液中：5 mM Tris-HCl pH 8.0、0.2 mM CaCl2、0.2 mM ATP、5%（w/v）蔗糖和1%（w/v）葡聚糖。然后將濃縮的蛋白質(zhì)等分為實(shí)驗(yàn)量，在液氮中快速冷凍，并在-70°C下儲(chǔ)存。如果在-70°C下儲(chǔ)存，蛋白質(zhì)可穩(wěn)定6個(gè)月。對(duì)于工作濃度，應(yīng)使用添加0.2 mM ATP（Cat.#BSA01，見(jiàn)試劑清單）和0.5 mM DTT的通用肌動(dòng)蛋白緩沖液（Cat.#BSA04）進(jìn)一步稀釋蛋白質(zhì)。肌肉肌動(dòng)蛋白是一種不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)，應(yīng)小心處理。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

蛋白質(zhì)純度通過(guò)12%聚丙烯酰胺凝膠上考馬斯藍(lán)染色蛋白質(zhì)的掃描密度測(cè)定來(lái)確定。發(fā)現(xiàn)心臟肌動(dòng)蛋白的純度>99%（見(jiàn)圖1）。

圖1：心臟肌動(dòng)蛋白純度測(cè)定。在12%SDS-PAGE系統(tǒng)中通過(guò)電泳分離100µg牛心臟肌動(dòng)蛋白樣品（分子量約43 kDa），并用考馬斯藍(lán)染色。用精密紅色蛋白質(zhì)分析試劑（Cat.#ADV02）測(cè)定蛋白質(zhì)定量。Mark12分子量標(biāo)記來(lái)自Invitrogen。

艾美捷肌動(dòng)蛋白（牛心臟 muscle）生物活性測(cè)定：

心臟肌動(dòng)蛋白的生物活性可以通過(guò)其在體外有效聚合成細(xì)絲并在降速分析中與未聚合成分分離的能力來(lái)確定。嚴(yán)格的質(zhì)量控制確保在該試驗(yàn)中，90%以上的肌肉肌動(dòng)蛋白可以聚合。

關(guān)于心臟肌動(dòng)蛋白的建議：

1.在缺乏ATP、二價(jià)陽(yáng)離子和二硫蘇糖醇（DTT）的情況下，單體肌動(dòng)蛋白不穩(wěn)定

2.單體肌動(dòng)蛋白將在>2 mM K+、Na+、和>0.05毫米Mg2+。

3.單體肌動(dòng)蛋白在pH值低于6.5或高于pH值8.5時(shí)不穩(wěn)定。

4.聚合肌動(dòng)蛋白比單體肌動(dòng)蛋白更能抵抗不利條件。因此，肌動(dòng)蛋白最好以聚合形式在4°C下儲(chǔ)存數(shù)周。如果薄膜的儲(chǔ)存時(shí)間超過(guò)24小時(shí)，建議添加抗菌劑，如0.05%

die氮化鈉或100 ug/ml氨芐西林和10µg/ml氯霉素。

5.將肌動(dòng)蛋白在液氮中以10毫克/毫升的速度快速冷凍，以保持6個(gè)月的高生物活性。