肌動(dòng)蛋白（牛心臟 muscle）說明書

大量的疾病和疾病是由引起突變?cè)诘任换虻牡幕蛘{(diào)節(jié)生產(chǎn)肌動(dòng)蛋白或其相關(guān)的蛋白質(zhì)。肌動(dòng)蛋白的產(chǎn)生也是一些病原微生物感染過程的關(guān)鍵。今天一起來看看艾美捷肌動(dòng)蛋白（牛心臟 muscle）。

艾美捷肌動(dòng)蛋白（牛心臟 muscle）采用Pardee和Spudich法從牛心肌中純化肌動(dòng)蛋白。牛心臟肌動(dòng)蛋白由84%的α心臟肌動(dòng)蛋白和16%的α骨骼肌動(dòng)蛋白亞型組成，分子量約為43 kDa。牛心臟肌動(dòng)蛋白純度大于99%，以白色凍干粉末的形式提供。

艾美捷肌動(dòng)蛋白（牛心臟 muscle）生物活性測(cè)定：

心臟肌動(dòng)蛋白的生物活性可以通過其在體外有效聚合成細(xì)絲并在降速分析中與未聚合成分分離的能力來確定。嚴(yán)格的質(zhì)量控制確保在該試驗(yàn)中，90%以上的肌肉肌動(dòng)蛋白可以聚合。

艾美捷肌動(dòng)蛋白（牛心臟 muscle）試劑：

1、牛心臟肌動(dòng)蛋白（Cat.#AD99）

一般肌動(dòng)蛋白緩沖液（5 mM Tris-HCl pH 8.0，0.2 mM CaCl2；類別#BSA01）

3、聚合緩沖液（500 mM KCl，20 mM MgCl2，10 mM ATP；類別#BSA02）

4.ATP，100 mM溶液（類別#BSA04）

5.1 M DTT（二硫蘇糖醇）

6、精密紅色蛋白分析試劑（Cat.#ADV02）

艾美捷肌動(dòng)蛋白（牛心臟 muscle）所需設(shè)備：

1、4°C下的微凝膠

2、Beckman Airbuge和Ultra Clear™ 離心管（Cat.#344718）、貝克曼超離心機(jī)和SW 55 Ti轉(zhuǎn)子，帶Ultra Clear™ 離心管（第344718類）和適配器（第356860類），或其他能夠在100000 x g下離心200µl的超離心機(jī)。

3、能夠在600 nm處測(cè)量吸光度的分光光度計(jì)。

方法：

1.在補(bǔ)充有0.2 mM ATP和0.5 mM DTT的普通肌動(dòng)蛋白緩沖液中，將心臟肌動(dòng)蛋白稀釋至0.4 mg/ml。

2、在冰上培養(yǎng)1小時(shí)，以解聚儲(chǔ)存期間形成的肌動(dòng)蛋白低聚物。

3、將蛋白質(zhì)在4°C微凝膠中以14k rpm離心15分鐘。

4、將上清液轉(zhuǎn)移到新的微濾管中，并用精密紅色蛋白質(zhì)分析試劑測(cè)定總蛋白質(zhì)濃度。將等份200µl肌動(dòng)蛋白溶液放入超離心管中。

6、向每個(gè)充氣管中添加20µl（體積的1/10）聚合緩沖液，并充分混合。

7、在室溫下培養(yǎng)1小時(shí)。

8、在100000 x g的條件下離心試管1小時(shí)，使聚合肌動(dòng)蛋白顆?；?。

9、將每根試管頂部90%的上清液移到干凈的微濾管中。

10、用精密紅蛋白分析試劑測(cè)定上清液（未聚合單體肌動(dòng)蛋白）中蛋白質(zhì)的濃度。該蛋白質(zhì)濃度用于確定離心期間肌動(dòng)蛋白聚合和顆粒化的效率。