開曼生物 前列腺素 E2快速檢測ELISA試劑盒檢測原理

背景：

前列腺素E2是多種細胞內(nèi)花生四烯酸的主要代謝產(chǎn)物，象類花生酸一樣，不能在胞內(nèi)儲存.當細胞被激活或者提供自由花生四烯酸后，PEG2才能被合成，并釋放到胞外；在體內(nèi)，通過15-脫氫酶途徑，PEG2能快速轉(zhuǎn)變成為無活性的13,14-dihydro-15-keto PGE2.PEG2的半衰期為30秒，在正常血液中的含量為3-12pg/ml.

艾美捷 開曼生物 前列腺素E2快速檢測ELISA試劑盒檢測原理：

本試驗基于PGE2和PGE2-乙酰膽堿酯酶（AChE）結(jié)合物（PGE2示蹤劑）之間的競爭，以獲得*的PGE2單克隆抗體。由于PGE2示蹤劑的濃度在PGE2濃度變化時保持恒定，因此能夠結(jié)合到PGE2單克隆抗體的PGE2示蹤劑的量將與孔中的PGE2濃度成反比。該抗體-PGE2復(fù)合物與先前連接到微孔的山羊多克隆抗小鼠IgG結(jié)合。清洗培養(yǎng)板以去除任何未結(jié)合的試劑，然后將Ellman試劑（含有乙酰膽堿酯酶基質(zhì)）添加到孔中。該酶反應(yīng)產(chǎn)物具有明顯的黃色，并在412 nm處強烈吸收。通過分光光度法測定的該顏色的強度與結(jié)合到孔中的PGE2示蹤劑的量成正比，該示蹤劑的量與孵化期間孔中存在的游離PGE2的量成反比；該過程的示意圖如下圖所示。

圖：乙酰膽堿酯酶的示意圖

艾美捷 開曼生物 前列腺素E2快速檢測ELISA試劑盒特點：

已經(jīng)證明能在尿液，血液或者培養(yǎng)基樣本中使用.一般情況下，尿液或者培養(yǎng)基樣本需稀釋后，直接用于試劑盒檢測；對于血液樣本，需要預(yù)先純化，因為PEG2在血液樣本中會很快代謝掉.

艾美捷 開曼生物 前列腺素E2快速檢測ELISA試劑盒檢測標準：

用1.0 ml ELISA緩沖液重新配制PGE2 Express ELISA標準品內(nèi)容物。該溶液（散裝標準品）的濃度將為10納克/毫升。儲存在4°C下；該標準將穩(wěn)定長達四周。

注：如果測定未用ELISA緩沖液稀釋至少10倍的培養(yǎng)基樣品，應(yīng)使用培養(yǎng)基代替ELISA緩沖液稀釋標準曲線和樣品。

制備用于ELISA的標準品：獲得八個干凈的試管，并將其編號為#1到#8。等分800µl ELISA緩沖液至試管#1和500µl ELISA緩沖液至試管#2-8。將200微升散裝標準品（10納克/毫升）轉(zhuǎn)移到試管#1中，并*混合。標準曲線上的個點，該標準品的濃度為2納克/毫升（2000微克/毫升）。通過從管#1中去除500µl并放置在管#2中連續(xù)稀釋標準溶液；*混合。接下來，從管#2中取出500µl，放入管#3中；*混合。對管道4-8重復(fù)此過程。這些稀釋標準品的儲存時間不應(yīng)超過24小時。