Nanoprobes丨Nanogold 標記條帶的凝膠染色

在用 艾美捷 Nanoprobes Nanogold® 標記蛋白質或其他分子后，它可以在聚丙烯酰胺凝膠上運行。隨后，可以使用LI Silver或GoldEnhance™對其進行顯影，以對含金條帶進行特異性染色。該過程快速、靈敏且具有選擇性，只需幾分鐘即可形成密集染色。它也適用于轉移印跡。這可用于區(qū)分哪些組件標有 Nanogold®

LI Silver增強方案：使用 LI Silver 進行凝膠染色輕松檢測凝膠和印跡上 的 Nanogold® 標記分子

艾美捷 Nanoprobes LI Silver增強方案特色：

1.銀增強劑凝膠染色：LI Silver

2.具體：僅開發(fā) Nanogold® 標記帶

3.快速：1-5分鐘

4.敏感：比通常的凝膠染色劑更敏感

5.可直接用于凝膠或印跡轉移

1.4 nm Nanogold® 粒子可以與銀一起顯影，使它們變得肉眼可見，從而將信號放大數千倍。如果您使用 monomaleimido-Nanogold、mono-NHS-Nanogold® 或 mono-amino-Nanogold® 標記蛋白質或其他分子，則可以使用銀增強劑在凝膠上輕松分析和檢測。

以下是檢測凝膠或印跡上 艾美捷 Nanoprobes Nanogold® 標記條帶的方案：

1.用 Nanogold® 標記后，通過柱層析、蔗糖梯度或其他純化方法去除未結合的金顆粒。在樣品中留下過量的游離 Nanogold® 會干擾預期的凝膠染色。

2.像往常一樣運行凝膠，有兩個預防措施：

A) Nanogold® 會被 β-巰基乙醇（或 DTT）降解，因此樣品不得與還原劑混合，即必須運行非還原凝膠。其他成分（SDS 等）的正常濃度是可以接受的。

B) 樣品不得加熱。上樣前，樣品經常在 SDS 中煮沸。由于 Nanogold® 在 50°C 以上會降解，因此不建議加熱。這通常不是限制，因為大多數樣品無需加熱即可獲得正常的凝膠圖案。

3.如果需要，可以將凝膠電轉移到硝酸纖維素上，但這不是必需的。

4.用幾次去離子水沖洗凝膠。由于銀顯影劑會被鹵化物沉淀，因此必須去除痕量的 NaCl。

5.將凝膠或印跡置于合適的培養(yǎng)皿中，并涂上足夠的新鮮制備的 LI Silver（目錄號 2013）以覆蓋凝膠。LI 銀是通過混合等量的 A 和 B 組分制備的。不要使用與 LI Silver *不同的常用凝膠銀染劑，也不能有效地開發(fā) Nanogold®。

6.觀察應該呈現(xiàn)棕黑色的帶的發(fā)展。未進入凝膠的含金聚集體或少量游離金可能會產生背景染色。通常的開發(fā)時間是 1-5 分鐘。較長的顯影時間（> 30 分鐘）將導致僅由顯影劑進行一些非特異性背景自成核染色。

7.當達到最佳染色時，通過在去離子水中沖洗來停止顯影。最后的染色凝膠現(xiàn)在是永丨久記錄。

8.對于所有條帶的比較和可視化，運行重復凝膠并用考馬斯藍或凝膠銀染色劑染色。

9.由于 Nanogold® 顆粒的重量增加（約 15,000），Nanogold® 標記的分子在凝膠上的運行通常高約 15,000 MW。因此，標記和未標記的分子被分開，它們的比例可以通過顯示總蛋白質含量的常用凝膠染色（考馬斯或凝膠銀染色）來估計。

文獻參考：

1.Gregori, L., J. F. Hainfeld, M. N. Simon, and D. Goldgaber. 1997. Binding of amyloid beta protein to the 20S proteasome. J Biol Chem 272 (1): 58–62

2，Wilkens, S. and Capaldi, R.A. Monomaleimidogold labeling of the gamma subunit of the Escherichia coli F1 ATPase examined by cryoelectron microscopy. Arch Biochem. Biophys., 229, 105-109 (1992).

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