定量分析protein A雜質(zhì)丨艾美捷Protein A殘留檢測試劑盒

艾美捷Protein A殘留檢測試劑盒是用來定量分析以抗體純化介質(zhì)protein A雜質(zhì)的試劑盒。

背景資料：

在單克隆抗體藥物的純化過程中，以蛋白A（Protein A）為基礎(chǔ)的親合層析是廣泛應(yīng)用的純化方法之一，單克隆抗體可以有效的在此步驟中得到純化。蛋白A 的最初來源是細(xì)菌（Staphylococcus aureus）細(xì)胞壁中的一個(gè)蛋白質(zhì)，研究表明蛋白A 可能對人體有潛在的危害，它的生物學(xué)作用包括刺激人體多種細(xì)胞素（IFNγ, TNFα, IL-1α,IL-1β, IL-2, IL-4）的釋放。由于在蛋白A 親合層析柱使用過程中會有微量的蛋白A 從層析柱上脫落下來，因此用靈敏的方法來確證單克隆抗體藥物中蛋白A 的殘留處于一個(gè)較低的和穩(wěn)定的水平是單克隆抗體藥物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)之一。

蛋白A (Protein A) 酶聯(lián)檢測試劑盒是用來定量分析生物藥物中蛋白A雜質(zhì)的試劑盒。首先，用不同濃度的蛋白A標(biāo)準(zhǔn)蛋白制作一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線來分析生物藥物中殘留蛋白A的含量。

具體方法為：先將蛋白A標(biāo)準(zhǔn)蛋白或者待測樣品適當(dāng)稀釋后加入已包被好抗蛋白A抗體的96孔平板中。經(jīng)過1.5小時(shí)的保溫，蛋白A與已經(jīng)固定在平板上的抗體結(jié)合形成抗原－抗體復(fù)合物。此復(fù)合物被隨后加入的生物素標(biāo)記的抗蛋白A的抗體結(jié)合并進(jìn)一步形成更高級的復(fù)合物，反應(yīng)45分鐘后洗去未結(jié)合的物質(zhì)。再加入鏈霉親合素-辣根過氧化物酶復(fù)合物（Streptavidin-HRP Conjugate），靜置30分鐘。因鏈霉親合素可以與任何帶生物素標(biāo)記的抗體相結(jié)合，從而使鏈霉親合素-辣根過氧化物酶復(fù)合物連接到平板上。接下來沖洗掉未結(jié)合的物質(zhì)，加入TMB底物。固相上的酶催化底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)，待顏色反應(yīng)一段時(shí)間后，終止反應(yīng)。用酶標(biāo)儀在450 nm波長下測定其結(jié)果，此結(jié)果能間接地反應(yīng)結(jié)合到平板上的蛋白A數(shù)量的多少。根據(jù)蛋白A標(biāo)準(zhǔn)曲線定量分析生物藥物中殘留蛋白A的含量。

艾美捷Protein A殘留檢測試劑盒：

Protein A ELISA kit

編號：ADI-900-057

規(guī)格：96 Wells（可做37個(gè)樣本?。?/span>

樣本類型：含有天然或者重組Protein A的中性緩沖液（無物種限制）

檢測方法：比色法，450 nm

組分：Microtiter plate, Conjugate, Antibody, Assay buffer 13, Wash buffer concentrate,Standard, TMB Substrate, Stop solution 2

保存條件：藍(lán)冰運(yùn)輸；收到貨后4℃保存（切勿冰凍）

僅用于科研實(shí)驗(yàn).

艾美捷Protein A殘留檢測技術(shù)信息說明：

對來自金黃色葡萄球菌(M)的天然蛋白 A、來自大腸桿菌(R) 的重組蛋白 A、來自大腸桿菌(G)的重組半胱氨酸蛋白 A和重組耐堿蛋白 A的不同蛋白 A 構(gòu)建體的檢測識別對來自大腸桿菌(S) 的變體進(jìn)行了測試，所得濃度從試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線中插值并顯示在所提供的圖中。

圖：煮沸后不同蛋白 A 構(gòu)建體的測定識別。從試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線內(nèi)插得到的濃度。通過將觀察到的濃度除以預(yù)期濃度來計(jì)算回收率百分比。A：來自金黃色葡萄球菌(Millipore)的天然蛋白A，n=9；B：來自大腸桿菌(Repligen)的重組蛋白A，n=9；C：來自大腸桿菌(GE)的重組半胱氨酸蛋白A ，n=12；D：來自大腸桿菌的重組抗堿性蛋白 A 變體（來自 GE 的 MabSelet SuRe），n = 12；圖形數(shù)據(jù)代表統(tǒng)計(jì)平均值 +/- 1 標(biāo)準(zhǔn)偏差。