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T7 RNA聚合酶在合成RNA的過程中,需要DNA模板與鎂離子(Mg2+)作為輔因子。牛血清蛋白(bovine serum albumin,BSA)及精胺(spermidine)對(duì)此酶具促進(jìn)效果。與細(xì)菌的RNA聚合酶的差異之一,在于T7RNA聚合酶不受抗生素立泛霉素(rifampicin)抑制。
艾美捷T7 RNA聚合酶是一種DNA依賴性RNA多聚酶(99kDa),對(duì)含有T7噬菌體啟動(dòng)子的DNA序列的體外RNA合成進(jìn)行催化。高濃縮版T7 RNA聚合酶HC非常適合建立和優(yōu)化高產(chǎn)量的體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。所提供的T7 IVT設(shè)置緩沖液、MgCl2和DTT溶液能夠測試不同的反應(yīng)條件,例如核苷酸/MgCl2濃度。
噬菌體T7 RNA聚合酶是一種DNA依賴性RNA多聚酶(99kDa),對(duì)含有T7噬菌體啟動(dòng)子的DNA序列的體外RNA合成進(jìn)行催化。
高濃縮版T7 RNA聚合酶HC非常適合建立和優(yōu)化高產(chǎn)量的體外轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。所提供的T7 IVT設(shè)置緩沖液、MgCl2和DTT溶液能夠測試不同的反應(yīng)條件,例如核苷酸/MgCl2濃度。
具有最小優(yōu)化的分析設(shè)置建議:HighYield T7 RNA合成試劑盒(#RNT-101)。
艾美捷T7 RNA聚合酶活性:
1μl T7 RNA聚合酶HC在37°下10分鐘內(nèi)產(chǎn)生>/=30μg RNA。這相當(dāng)于1000 U NEB的T7 RNA聚合酶(高濃度),#M0460T(活性測定條件:1x T7 IVT建立緩沖液,補(bǔ)充10 mM DTT、12 mM MgCl2、3 mM NTPs、1μl T7 RNA聚合酶HC和1μg DNA模板(1.4 kpb RNA轉(zhuǎn)錄物),20μl。用熒光微板測定法測定RNA產(chǎn)量。)
艾美捷T7 RNA聚合酶組分:
T7 RNA聚合酶HC
1x 50μl(2μg/μl)
50 mM Tris-HCl、1 mM EDTA、100 mM NaCl、5 mM DTT、0.1%Triton-X-100、50%甘油(v/v),pH 8.0
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