QuickTiter腺病毒滴度檢測試劑盒-快速定量病毒上清液的腺病毒滴度

重組腺病毒在研究和治療應(yīng)用中具有巨大的潛力。它們在將遺傳物質(zhì)引入宿主細胞時提供了諸多優(yōu)勢，宿主細胞范圍非常廣泛。該病毒已被用于感染許多哺乳動物細胞類型（包括增殖性和非增殖性細胞），以實現(xiàn)重組蛋白的高效表達。重組腺病毒尤其適用于那些通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率較低的細胞系中的基因轉(zhuǎn)移和蛋白表達。病毒進入細胞后，保持染色體外狀態(tài)（即不整合到宿主染色體中，因此不會激活或失活宿主基因）。最近，重組腺病毒已被用于將RNAi導(dǎo)入細胞。

HEK293細胞或其變體被用作病毒擴增的宿主細胞。重組腺病毒可以在高滴度下生長（101?病毒顆粒/mL，可濃縮至1013病毒顆粒/mL），并可通過CellBiolabs的ViraBind™腺病毒純化試劑盒或傳統(tǒng)的CsCl超速離心法進行純化。

通過病毒載體傳遞基因的一個特別挑戰(zhàn)是準(zhǔn)確測量病毒滴度。傳統(tǒng)上，通過培養(yǎng)中的噬菌斑形成單位（PFU）測定感染性顆粒，該方法根據(jù)稀釋度計算病毒噬菌斑的數(shù)量。其他方法則利用抗體通過免疫組化染色或流式細胞術(shù)（FACS）分析識別腺病毒六鄰體蛋白。這些方法耗時較長，需要較長的感染周期，且存在較高的實驗間差異，并受病毒-細胞相互作用的影響。對于高純度病毒樣本，可通過260nm的光吸收度估算病毒顆粒的總數(shù)。然而，這種方法不能用于未純化的病毒上清液，因為其中的某些成分會對260nm的光吸收度產(chǎn)生貢獻。

艾美捷QuickTiter腺病毒滴度檢測試劑盒（#VPK-106）不涉及細胞感染，而是特異性地測量純化病毒或未純化病毒上清液樣本中的病毒核酸含量。特別是對于未純化的病毒上清液，該試劑盒在純化步驟之前確定上清液滴度方面非常有用。試劑盒的檢測靈敏度下限為1×10?病毒顆粒或1×101?病毒顆粒/mL（當(dāng)使用100µL腺病毒上清液進行檢測時），這對于中高滴度的腺病毒樣本是足夠的。整個過程大約需要45到60分鐘。每套試劑盒提供足夠的試劑，可進行多達20次病毒樣本和對照的檢測。

QuickTiter™腺病毒定量試劑盒為純化病毒和病毒上清液的腺病毒滴度快速定量提供了一個高效的系統(tǒng)。

相關(guān)產(chǎn)品：

1.AD-100：293AD細胞系

2.AD-200：ViraDuctin™腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)試劑

3.VPK-099：ViraBind™腺病毒小量純化試劑盒

4.VPK-109：QuickTiter™腺病毒滴度免疫測定試劑盒

5.VPK-110：QuickTiter™腺病毒滴度ELISA試劑盒

6.VPK-111：快速RCA測定試劑盒

7.VPK-252：RAPAd®CMV腺病毒表達系統(tǒng)

QuickTiter腺病毒滴度檢測試劑盒組成（藍色冰袋運輸）：

1.QuickTiter™溶液A（部件編號40020）：一瓶，200µL。

2.QuickTiter™腺病毒捕獲溶液（部件編號40021）：一瓶，1.0mL。

3.QuickTiter™溶液B（10倍）（部件編號40022）：兩瓶，每瓶1.8mL。

4.QuickTiter™溶液C（2倍）（部件編號40023）：兩瓶，每瓶1.5mL。

5.CyQuant®GR染料（400倍）（部件編號105101）：一瓶，50µL。

6.QuickTiter™腺病毒DNA標(biāo)準(zhǔn)品（部件編號40025）：一瓶，500µL，含100µg/mL腺病毒DNA標(biāo)準(zhǔn)品。

未提供材料：

1.感興趣的重組腺病毒：純化或未純化的高滴度病毒上清液

2.HEK293細胞及細胞培養(yǎng)生長培養(yǎng)基

3.細胞培養(yǎng)離心機

4.0.45µm濾膜

5.含10mMMgCl?、1mMCaCl?的1倍PBS

6.1倍TE（10mMTris，pH7.5，1mMEDTA）

7.熒光酶標(biāo)儀

儲存：

將所有試劑盒組分儲存于4°C。

安全注意事項：

請記住，您將處理含有感染性病毒的樣本。請遵循NIH推薦的針對BSL-2生物體的所有材料的指南。

結(jié)果示例：

以下圖表展示了典型的定量結(jié)果。以下數(shù)據(jù)僅供參考，不應(yīng)用于解釋實際結(jié)果。 

圖1：腺病毒DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線。QuickTiter™腺病毒DNA標(biāo)準(zhǔn)品按照上述說明進行稀釋。使用MolecularDevice的SpectraMaxGeminiXS熒光計（帶485/538nm濾光片組和530nm截止濾光片）進行熒光測量。

QuickTiter腺病毒滴度檢測試劑盒文獻參考：

1. Wu N and Ataai M. M (2000) Curr Opin Biotechnol. 11(2):205-8.

2. Mizuguchi et al., (2001) Advanced Drug Delivery Reviews 52:165–176.

3. Vorburger, S. A. and Hunt, K. K. (2002) Oncologist 7:46–59.