一、novoprotein DNA Marker特點(diǎn)：

• 每個(gè)條帶均為單獨(dú)定量制備
• 可以用于 DNA段大小和濃度的判斷
• 帶型清晰明亮、條帶大小準(zhǔn)確，覆蓋范圍廣（100bp-10kb）
• 明暗條帶優(yōu)化比例，條帶更美觀
• 內(nèi)含上樣緩沖液和指示染料可直接上樣、快捷方便
• 添加了特定穩(wěn)定劑，穩(wěn)定性高，于-20℃可保存兩年以上
• 適用于 TAE 和 TBE緩沖體系
• 可以任選條帶定制DIY DNA Marker
• 價(jià)格優(yōu)勢(shì)明顯
   

二、如何選擇novoprotein DNA Marker
如圖為novoprotein 在售的18種DNA Marker，可以根據(jù)您的目的片段大小，選擇附近條帶較密的marker，這樣對(duì)目標(biāo)片段大小的估計(jì)較準(zhǔn)確。兩個(gè)不同目的帶同時(shí)電泳時(shí)，盡量選擇同時(shí)可以標(biāo)定兩個(gè)目的片段的marker。如果您的實(shí)驗(yàn)有特殊條帶需求，我們還可以為您提供DIY DNA Marker定制服務(wù)。
 

(DNA Marker電泳圖)

三、novoprotein DNA Marker使用方法及注意事項(xiàng)

使用注意事項(xiàng)：

• 建議選擇合適濃度的瓊脂糖凝膠（DNA段越短膠濃度越大：<0.5k，膠濃度1.2-1.5%；>10kb濃度，0.3-0.7%；0.5<DNA<10kb，膠濃度為0.8-1.0%）
• DNA Marker使用前*化凍并混合均勻
• 取5 μl直接加入瓊脂糖凝膠的加樣孔中（約每1 mm點(diǎn)樣孔寬度加1 μl）進(jìn)行電泳
• 低電壓下不受場(chǎng)強(qiáng)影響，分離效果好。一般電壓4-10v/cm，大片段電泳時(shí)注意控制電壓。
•  及時(shí)更換電泳緩沖液

保存注意事項(xiàng)：

4℃保存3個(gè)月以上，-20℃保存2年。（如客戶電泳使用頻繁可于室溫隨時(shí)使用，但我們推薦客戶于4℃存放）
DNA Marker 加樣時(shí)盡量使用新槍頭，避免核酸酶污染

四、DNA Marker使用問(wèn)題解析

• 條帶模糊 

原因	解決方案
凝膠濃度不合適	根據(jù)片段長(zhǎng)短選擇合適的凝膠濃度
電泳緩沖液緩沖能力差	反復(fù)使用后緩沖能力下降需及時(shí)更換
電壓過(guò)高時(shí)間過(guò)長(zhǎng)	電壓不應(yīng)該超過(guò)20V/cm，電泳溫度應(yīng)該低于30℃
上樣量過(guò)多	減少上樣量以marker條帶為準(zhǔn)條帶更清晰
電泳膠質(zhì)量不好	選擇好膠粉充分溶膠
Marker降解	防止核酸酶污染，確保保存溫度和時(shí)間

• 
  亮度不夠或不均一

原因	解決方案
上樣量少	可適度增加上樣量
EB濃度低	按照要求加入EB，一般為終濃度0.5-1ug/ml
凝膠不均勻，膠質(zhì)過(guò)厚	充分煮膠至透明無(wú)雜質(zhì)和絲狀物，倒膠均勻適量
電泳膠亮度不均一	電泳時(shí)間過(guò)長(zhǎng)時(shí)，瓊脂糖膠前部EB會(huì)遷移至膠后部，造成前后DNA染色亮度不一，可在電泳開始前，在瓊脂糖膠前部，靠近電泳槽陽(yáng)極附近加入少量EB并混勻。

• 
  條帶污染

原因	解決方案
污染核酸外切酶至DNA降解	使用滅菌的槍頭，及時(shí)蓋緊管蓋
點(diǎn)樣時(shí)污染	加樣時(shí)及時(shí)更換槍頭

 

五、Marker條帶比較分析

對(duì)市場(chǎng)上熱銷DNA Ladder 2000同類型產(chǎn)品調(diào)查對(duì)比見(jiàn)下表：

公司名稱	次數(shù)	目錄價(jià)	定量條帶(標(biāo)稱)	普通條帶(標(biāo)稱)	備注
Takara	40	85	30ng/ul	10ng/ul	5ul電泳，亮帶150ng,其余50ng
康為世紀(jì)	50	48	30ng/ul	10ng/ul	5ul電泳，亮帶150ng,其余50ng
東盛	60	90	30ng/ul	15ng/ul	5ul電泳，亮帶150ng,其余75ng
SinoBio	50	70	20ng/ul	10ng/ul	5ul電泳，亮帶100ng,其余50ng
全式金	50	70	20ng/ul	10ng/ul	5ul電泳，亮帶100ng,其余50ng
天根	50	90	17ng/ul	8ng/ul	6ul電泳，亮帶100ng,其余50ng

 

由表中可以看出，我們的marker濃度在市場(chǎng)上位于中等水平，從價(jià)格來(lái)看也比較有優(yōu)勢(shì)，且我們的活動(dòng)力度較大。（目前marker產(chǎn)品，買二送二）

為了取得美觀的DNA Marker電泳分布圖譜，我們?cè)诋a(chǎn)品制備過(guò)程小幅度調(diào)整了非定量條帶的濃度，結(jié)果使定量條帶更醒目，相對(duì)其他條帶更易區(qū)分。

• 
  Marker條帶電泳圖譜比較

 

• Novoprotein新產(chǎn)品DNA Ladder 2000 plus II
• 2、Novoprotein DNA Ladder 2000
• 3、T 1公司同類型 Marker DL2000
• 4、T 2公司同類型 Marker D2000

 

 

 

(1%瓊脂糖膠，2ul電泳可見(jiàn)novoprotein DNA marker條帶清楚，帶型美觀。)