16HBE 人支氣管上皮細(xì)胞使用說(shuō)明書
細(xì)胞名稱16HBE 人支氣管上皮細(xì)胞
貨號(hào)ZQ 0001
種屬人
組織來(lái)源支氣管
形態(tài)上皮
生長(zhǎng)方式貼壁
安全性所有腫瘤和病毒轉(zhuǎn)染的細(xì)胞均視為有潛在的生物危
害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防
護(hù)
培養(yǎng)培養(yǎng)基：美國(guó)sciencell 角質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基，貨號(hào)：
2101
溫度：37℃
氣相：95%空氣，5%二氧化碳
傳代收到細(xì)胞后，請(qǐng)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)瓶外表進(jìn)行消毒，將細(xì)
胞置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行1-2 小時(shí)的緩沖，待細(xì)胞恢復(fù)
基本生長(zhǎng)狀態(tài)后，進(jìn)行后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。
在倒置顯微鏡下觀察整個(gè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況：
（一）細(xì)胞未長(zhǎng)至85%時(shí)，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶
消毒后放到生物操作臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，打開(kāi)細(xì)
胞培養(yǎng)瓶，若培養(yǎng)瓶上無(wú)特殊標(biāo)注，吸去剩余培養(yǎng)
液，只留6-8ml 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
（二）細(xì)胞已長(zhǎng)滿（達(dá)85-95%）。即可進(jìn)行傳代，
具體步驟如下：
1.棄去培養(yǎng)液，用PBS 洗滌1-2 次，
2.加入1.0ml 胰酶消化液，37℃消化，顯微鏡下觀
察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞回縮變圓、透亮、輕拍甁
壁呈流沙樣脫落，則迅速拿回操作臺(tái)，加入雙倍的
含10%血清的*培養(yǎng)液，終止消化并輕輕吹打細(xì)
胞，使其變成單細(xì)胞懸液，
3.將細(xì)胞收集于離心管中離心1000rmp/5min，棄上
清，輕彈管底，將細(xì)胞彈散，
4.加入新鮮培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，進(jìn)行傳代、凍存，
5.如果沒(méi)有特別說(shuō)明，建議收到細(xì)胞后的次傳
代比例為1:2。
注：1.觀察細(xì)胞密度用（4X 物鏡）低倍鏡觀
察，以便正確的判斷細(xì)胞密度；觀察細(xì)胞形態(tài)請(qǐng)用
（10X 或20X）高倍鏡觀察；
2.瓶中運(yùn)輸?shù)呐囵B(yǎng)液不能重復(fù)使用，請(qǐng)換新鮮培養(yǎng)
液培養(yǎng)；
3.有些細(xì)胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落，可
離心重懸后接種到新瓶?jī)?nèi)；
4.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、漏液及細(xì)胞污
染，請(qǐng)及時(shí)與我們聯(lián)系。
保存凍存條件：70%基礎(chǔ)培養(yǎng)液+20%胎牛血清
+10%DMSO
保存條件：液氮存儲(chǔ)
供應(yīng)限制經(jīng)供研究之用
常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案1.培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細(xì)胞極大可能會(huì)
污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決。
2.細(xì)胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開(kāi)封，瓶口酒精擦拭后平躺
放置在培養(yǎng)箱。1-2 小時(shí)后觀察， 如細(xì)胞大部分又
貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可
以去掉，留8-10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長(zhǎng)至匯
合度85-95%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，
將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培
養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)
一直跟蹤指導(dǎo)，直到問(wèn)題解決。