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細(xì)胞生長(zhǎng)曲線實(shí)驗(yàn)
閱讀:555 發(fā)布時(shí)間:2019-1-14實(shí)驗(yàn)方法原理
細(xì)胞生長(zhǎng)曲線是測(cè)定細(xì)胞生長(zhǎng)數(shù)的常用方法,是判定細(xì)胞活力的重要指標(biāo)。一般細(xì)胞傳代之后,經(jīng)過短暫的懸浮然后貼壁,隨后度過長(zhǎng)短不同的潛伏期,即進(jìn)入大量分裂的指數(shù)生長(zhǎng)期。為了準(zhǔn)確描述整個(gè)過程中細(xì)胞數(shù)目的動(dòng)態(tài)變化,典型的生長(zhǎng)曲線可分為生長(zhǎng)緩慢的潛伏期,斜率較大的指數(shù)生長(zhǎng)期,呈平臺(tái)狀的平頂期及退化衰亡4個(gè)部分。細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定一般可利用細(xì)胞計(jì)數(shù)法進(jìn)行。
實(shí)驗(yàn)材料 細(xì)胞
試劑、試劑盒 D-Hanks液牛血清RPMI1640雙抗0.08%胰酶
儀器、耗材 凈化工作臺(tái)離心機(jī)恒溫水浴箱冰箱倒置相差顯微鏡 培養(yǎng)箱吸管培養(yǎng)瓶吸頭 槍頭24培養(yǎng)板膠塞微量加樣槍紅血球計(jì)數(shù)板
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞,采用一般傳代方法進(jìn)行消化,制成細(xì)胞懸液。
2. 計(jì)數(shù),地將細(xì)胞分別接種于21~30個(gè)大小一致的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)或培養(yǎng)孔(以24孔培養(yǎng)板為宜),每瓶或孔細(xì)胞總數(shù)要求一致,加入培養(yǎng)液的量也要一致。
3. 每天或每隔一天取出3瓶(孔)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),計(jì)算均值。培養(yǎng)3~5 d 常要給未計(jì)數(shù)的細(xì)胞換液。
4. 以培養(yǎng)時(shí)間為橫軸,細(xì)胞數(shù)為縱軸(對(duì)數(shù)),描繪在半對(duì)數(shù)座標(biāo)紙上,連接成曲線后即成該細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線。
收起
注意事項(xiàng)
1. 細(xì)胞生長(zhǎng)曲線雖然為常用,但有時(shí)其反映數(shù)值不夠,可有20~30%的誤差,需結(jié)合其它指標(biāo)進(jìn)行分析。
2. 現(xiàn)在很多實(shí)驗(yàn)室利用培養(yǎng)板采用MTT法進(jìn)行生長(zhǎng)曲線測(cè)定,較為簡(jiǎn)便。
其他
1. 標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞生長(zhǎng)曲線近似“S”形,一般在傳代后天細(xì)胞數(shù)有所減少,再經(jīng)過幾天的潛伏適應(yīng)期,然后進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,達(dá)到平臺(tái)期后生長(zhǎng)穩(wěn)定,后到達(dá)衰老。
2. 在生長(zhǎng)曲線上細(xì)胞數(shù)量增加1倍時(shí)間稱為細(xì)胞倍增時(shí)間,可以從曲線上換算出。