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技術(shù)文章

BCPAP人甲狀腺癌乳頭狀細(xì)胞STR鑒定報告

閱讀:519          發(fā)布時間:2019-2-19

BCPAP人甲狀腺癌乳頭狀細(xì)胞STR鑒定報告

 

一、細(xì)胞培養(yǎng)條件

 

生長特性 貼壁 凍存條件 90%FBS+10%DMSO

 

培養(yǎng)體系 DMEM+10%FBS

 

氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

 

傳代方法 1:2-1:4 傳代情況 2天換液

 

備注 收集瓶子培養(yǎng)基,過渡使用。

 

二、細(xì)胞收到后處理

 

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿*培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)暮棉k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后,先打開外包裝,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi),嚴(yán)格無菌操作,培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察:未超過80%匯合度時,可將瓶裝的*培養(yǎng)液收集至離心管中,加入6ml*培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng);超過80%匯合度時,根據(jù)情況傳代或者凍存,具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。(注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話,放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松)

 

三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟

 

1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加4-6mL*培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中),培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

 

細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

 

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