Instruction manual
GIST-430 人胃腸道間質(zhì)瘤細胞
Catalogue No.: C470
Product Format: a T25 flask
Culture Properties：貼壁
Complete Growth Medium: 89%McCoy’s +10%FBS+1%雙抗
Atmosphere: air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
Application: Cells and cancer research
NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.
Components
Item Specifications
a T25 flask 2X106
Manual 1 copy
Operation steps for cell culture
1. 吸走用于培養(yǎng)基，加入3-5mL PBS 后輕輕晃動培養(yǎng)瓶潤洗細胞；
2. 吸干凈PBS 后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒細胞表
面，培養(yǎng)瓶放37 度培養(yǎng)箱消化；
（細胞對于消化比較敏感，消化過度會嚴重影響細胞狀態(tài)，導致細胞傳代死亡漂浮或
者傳代后不長。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時即可終止，禁止
消化到細胞*漂浮?；靹蚣毎麜r盡量輕柔，不要吹出大量氣泡。）
3. 加入6-8ml *培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹下細胞混勻；
4. 將混勻的細胞1000rpm（約150g）離心3min，棄上清，再用新鮮培養(yǎng)基重懸37 度培
養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)；
傳代比例: 不同細胞生長速度不一，具體傳代比例視細胞生長速度而定，大部分細胞適用
1:3-1:4 傳代，生長較慢的細胞可以1:2 傳代。
Cell cryopreservation
1.凍存液：92%*培養(yǎng)基+8%DMSO（可以根據(jù)實驗室條件自行選擇）
2.降溫步驟：4 度10min，-20 度2h，-80 過夜后液氮保存。
Instruction manual
Tips：
1. 細胞經(jīng)過運輸后，部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。貼壁細胞
可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。加5ml
PBS 重懸細胞，再900-1000rpm(約150g)離心3min，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸接種到新的培
養(yǎng)瓶。第二次PBS 重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS 重懸的步
驟；如果碎片很多，建議PBS 多洗幾次。
2. 細胞生長不均時，可以將細胞消化吹散后加入新的培養(yǎng)基重新接種或傳代。
3. 細胞生長緩慢時，可以選擇提高血清濃度培養(yǎng)（高不超過20%），也可以根據(jù)細胞生長狀態(tài)，
選擇傳代細胞到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。
4. 不同細胞貼壁性差異比較大，所以消化時間差別較大，20s-10min 均有可能，具體以細胞消化到
相互分離但未脫落，并可以輕輕吹下為準，嚴禁消化到細胞*漂浮?？蛻粝^度導致細胞死
亡、漂浮、生長緩慢，不提供免費售后服務(wù)。
5. 干冰發(fā)貨均為兩支，客戶先復蘇一支，若復蘇失敗及時聯(lián)系我方并在我方指導下復蘇第二支。若
客戶同時復蘇兩支均狀態(tài)不佳，我方不提供免費售后服務(wù)。
6. 細胞狀態(tài)正常時，應(yīng)盡快凍存細胞保種，凍存后應(yīng)隨機抽取一支檢測凍存效果。我方不對客戶凍
存細胞導致死亡負責，客戶凍存細胞死亡不提供免費售后服務(wù)。
Notice：
客戶收到細胞有任何疑問請及時致電我們，細胞收到后1 周內(nèi)沒有任何電話，或其他形式回訪，
默認為細胞質(zhì)量沒問題，之后出了任何問題不給予免費售后。細胞免費售后只提供一次，若重發(fā)后再
次培養(yǎng)死亡不再免費補發(fā)，細胞收貨時已經(jīng)死亡或密度不足的除外。