人胚胎干細胞H9無飼養(yǎng)層培養(yǎng)方法

使用說明書

細胞名稱 H9 Feeder Free 人胚胎干細胞H9 無飼養(yǎng)層

貨號 0692

種屬 人

組織來源 人胚胎內細胞團

形態(tài) 球形克隆

生長方式 貼壁

安全性 所有腫瘤和病毒轉染的細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護

培養(yǎng) *培養(yǎng)液： mTeSR1 人ES/iPS 細胞無飼養(yǎng)層*培養(yǎng)試劑盒（Stem cell, 貨號

85850）

傳代消化液：溫和分離細胞試劑（Stem cell, 貨號07174）

凍存液：無血清無動物成分細胞凍存液（Stem cell, 貨號07930）

基質膠：hES 基質膠（BD，貨號354277）

溫度：37℃

溫度：37℃  氣相：95%空氣，5%二氧化碳

傳代 收到細胞后，請對細胞培養(yǎng)瓶外表進行消毒，將細胞置于培養(yǎng)箱中進行 1-2 小時的緩

沖，待細胞恢復基本生長狀態(tài)后，進行后續(xù)細胞實驗。

在倒置顯微鏡下觀察整個細胞生長情況：人胚胎干細胞H9無飼養(yǎng)層培養(yǎng)方法

（一）細胞未長至 85%時，用 75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到生物操作臺內，嚴格無

菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶，若培養(yǎng)瓶上無特殊標注，吸去剩余培養(yǎng)液，只留 6-8ml培

養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。

（二）細胞已長滿（達 85-95%）。即可進行傳代，具體步驟如下：

1.棄去培養(yǎng)液，用 PBS 洗滌 1-2 次，

2.加入 1.0ml 胰酶消化液，37℃消化，顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞回縮變圓、

透亮、輕拍甁壁呈流沙樣脫落，則迅速拿回操作臺，加入雙倍的含 10%血清的*培

養(yǎng)液，終止消化并輕輕吹打細胞，使其變成單細胞懸液，

3.將細胞收集于離心管中離心 1000rmp/5min，棄上清，輕彈管底，將細胞彈散，

4.加入新鮮培養(yǎng)液重懸細胞，進行傳代、凍存，

5.如果沒有特別說明，建議收到細胞后的次傳代比例為 1:2。

注：1.觀察細胞密度用（4X物鏡）低倍鏡觀察，以便正確的判斷細胞密度；觀

察細胞形態(tài)請用（10X 或 20X）高倍鏡觀察；

2.瓶中運輸?shù)呐囵B(yǎng)液不能重復使用，請換新鮮培養(yǎng)液培養(yǎng)；

3.有些細胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落，可離心重懸后接種到新瓶內；

4.收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、漏液及細胞污染，請及時與我們聯(lián)系。

保存 凍存條件：70%基礎培養(yǎng)液+20%胎牛血清+10%DMSO 

保存條件：液氮存儲

供應限制 僅供研究之用

常見問題 1.培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：細胞極大可能會污染，所以我們會及時安排幫老師

解決方案 解決。

人胚胎干細胞H9無飼養(yǎng)層培養(yǎng)方法

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