產(chǎn)品及特點(diǎn)

甲型肝炎病毒(Hepatitis A Virus，HAV)會(huì)引起甲型肝炎，該病毒病毒主要通過糞、口途徑傳播，傳染源多為病人。甲型肝炎的潛伏期為 15～45 天，易感群體多為兒童及青年，發(fā)病率隨年齡增長而遞減，感染后臨床表現(xiàn)多從發(fā)熱、疲乏和食欲不震開始，繼而出現(xiàn)肝腫大、壓痛、肝功能損害，部份患者可出現(xiàn)黃疸。該病毒的感染對(duì)人體健康有較大損害，因此快速靈敏診斷具有重要意義。為此本公司開發(fā)了本產(chǎn)品，可用于在科研領(lǐng)域快速定量檢測(cè)甲型肝炎病毒。它具有下列特點(diǎn)：

1.一站式，用于不需要單獨(dú)準(zhǔn)備每種成分，包括引物和對(duì)照。

2.根據(jù)甲型肝炎病毒的保守基因序列設(shè)計(jì)的引物，具有良好的特異性。

3.靈敏度可以達(dá)到 1000 拷貝/反應(yīng)。

4.使用一管式 RT-PCR 技術(shù)，RT 和PCR 兩步在一個(gè)試管內(nèi)完成，不需要中間轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。

5.本產(chǎn)品足夠 50 次 30μL 體系的 RT-PCR。

規(guī)格及成份

注：為避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供甲型肝炎病

毒專一的 DNA 片段作為陽性對(duì)照。

 運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，保存期限為 12 個(gè)月。收到貨后陽性對(duì)照需要跟其他成分分

 

開放置，因?yàn)槠淙菀孜廴酒渌煞?，造成假陽性?/span>

 

自備試劑

 

樣品 RNA

 

使用方法

一、樣品 RNA 的制備

1. 如果有 N 個(gè)樣品，必須設(shè)置 N+2 個(gè)提取，多出的一個(gè)是 PC（樣品制備陽性對(duì)照），一個(gè)是 NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?/span> 10μL  甲型肝炎病毒 PCR 陽性

 

對(duì)照的 10000 倍稀釋的（稀釋后濃度為 1×10E4 拷貝/μL，10μL 相當(dāng)于 1 萬拷貝，可以將 10μL 原液加入到 990μL  自備TE 溶液中，充分混勻，此為 100倍稀釋液。再取 10μL 此稀釋液加入到 990μL  自備 TE 溶液中，充分混勻，此為 10000 倍稀釋液）再加上一定量的水作為制備的陽性對(duì)照（加水后其總體積跟樣品一樣，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）?？梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫?duì)照。制備所得成為樣品RNA。

2. 用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 RNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容。本試劑盒免費(fèi)贈(zèng)送 20 次天凈沙核酸釋放劑試用裝，其使用手冊(cè)可以從本公司網(wǎng)站搜索天凈沙核酸釋放劑或產(chǎn)品編號(hào) 61202 下載。

二、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)（20μL 體系）

2. 如果有 N+2 個(gè)樣品，則標(biāo)記 N+4 個(gè)PCR 管（額外增加的兩個(gè)管一個(gè)是 RT-PCR

陽性對(duì)照，另一個(gè)是 RT-PCR 陰性對(duì)照）并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：

 

成份	N+2 個(gè) 樣品管	RT-PCR 陰性對(duì)照	RT-PCR 陽性對(duì)照
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	各 4 μL	4 μL	4 μL
甲型肝炎病毒 RT-PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 個(gè)制備的樣品	各 12.5 μL	不加	不加
甲型肝炎病毒 RT-PCR 陽性對(duì)照 10000 倍稀釋液	不加	不加	12.5 μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

 

4.上機(jī)進(jìn)行 RT-PCR，RT-PCR 反應(yīng)參數(shù)為:

過程	溫度	時(shí)間
逆轉(zhuǎn)錄	42℃	60 分鐘
預(yù)變性	95℃	5 分鐘
PCR 反應(yīng) （35 個(gè)循環(huán)）	95℃	30 秒
	55℃	30 秒
	72℃	30 秒
延伸	72℃	5 分鐘

 

5.瓊脂糖電泳檢測(cè)擴(kuò)增效果，陽性樣品預(yù)期得到的擴(kuò)增產(chǎn)物長度為 192bp。如果陰性對(duì)照有此擴(kuò)增產(chǎn)物或陽性對(duì)照無此擴(kuò)增產(chǎn)物，則說明實(shí)驗(yàn)失敗，需要分析實(shí)驗(yàn)失敗的原因。只有在陰性對(duì)照沒有此擴(kuò)增產(chǎn)物、陽性對(duì)照有此擴(kuò)增產(chǎn)物的情況下，才有必要分析樣品的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，如果有此擴(kuò)增產(chǎn)物則為陽性，如果無則為陰性。

關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 甲型肝炎病毒可視化 RT-LAMP 檢測(cè)試劑盒
本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。