產(chǎn)品及特點

甲型肝炎病毒(Hepatitis A Virus，HAV)會引起甲型肝炎，該病毒病毒主要通過糞、口途徑傳播，傳染源多為病人。甲型肝炎的潛伏期為 15～45 天，易感群體多為兒童及青年，發(fā)病率隨年齡增長而遞減，感染后臨床表現(xiàn)多從發(fā)熱、疲乏和食欲不震開始，繼而出現(xiàn)肝腫大、壓痛、肝功能損害，部份患者可出現(xiàn)黃疸。該病毒的感染對人體健康有較大損害，因此快速靈敏診斷具有重要意義。為此本公司開發(fā)了本產(chǎn)品，可用于在科研領(lǐng)域快速定量檢測甲型肝炎病毒。它具有下列特點：

1.一站式，用于不需要單獨準備每種成分，包括引物和對照。

2.根據(jù)甲型肝炎病毒的保守基因序列設(shè)計的引物，具有良好的特異性。

3.靈敏度可以達到 1000 拷貝/反應(yīng)。

4.使用一管式 RT-PCR 技術(shù)，RT 和PCR 兩步在一個試管內(nèi)完成，不需要中間轉(zhuǎn)移樣品，降低了操作誤差和可能的污染。

5.本產(chǎn)品足夠 50 次 30μL 體系的 RT-PCR。

規(guī)格及成份

注：為避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供甲型肝炎病

毒專一的 DNA 片段作為陽性對照。

 運輸及保存

低溫運輸，-20℃保存，保存期限為 12 個月。收到貨后陽性對照需要跟其他成分分

 

開放置，因為其容易污染其他成分，造成假陽性。

 

自備試劑

 

樣品 RNA

 

使用方法

一、樣品 RNA 的制備

1. 如果有 N 個樣品，必須設(shè)置 N+2 個提取，多出的一個是 PC（樣品制備陽性對照），一個是 NC（樣品制備陰性對照）。可以用 10μL  甲型肝炎病毒 PCR 陽性

 

對照的 10000 倍稀釋的（稀釋后濃度為 1×10E4 拷貝/μL，10μL 相當于 1 萬拷貝，可以將 10μL 原液加入到 990μL  自備TE 溶液中，充分混勻，此為 100倍稀釋液。再取 10μL 此稀釋液加入到 990μL  自備 TE 溶液中，充分混勻，此為 10000 倍稀釋液）再加上一定量的水作為制備的陽性對照（加水后其總體積跟樣品一樣，樣品體積多少取決于所用試劑盒的要求）?？梢杂盟鳛橹苽涞年幮詫φ?。制備所得成為樣品RNA。

2. 用自選方法純化 N+2 個樣品的 RNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)病毒 RNA 提取試劑盒兼容。本試劑盒免費贈送 20 次天凈沙核酸釋放劑試用裝，其使用手冊可以從本公司網(wǎng)站搜索天凈沙核酸釋放劑或產(chǎn)品編號 61202 下載。

二、設(shè)置 RT-PCR 反應(yīng)（20μL 體系）

2. 如果有 N+2 個樣品，則標記 N+4 個PCR 管（額外增加的兩個管一個是 RT-PCR

陽性對照，另一個是 RT-PCR 陰性對照）并按照下表在 PCR 管中加入下列成分：

 

成份	N+2 個 樣品管	RT-PCR 陰性對照	RT-PCR 陽性對照
5×雙酶一管式 RT-PCR Buffer	各 4 μL	4 μL	4 μL
甲型肝炎病毒 RT-PCR 引物混合液	各 2 μL	2 μL	2 μL
N+2 個制備的樣品	各 12.5 μL	不加	不加
甲型肝炎病毒 RT-PCR 陽性對照 10000 倍稀釋液	不加	不加	12.5 μL
MMLV-Taq Mix	1.5 μL	1.5 μL	1.5 μL

 

4.上機進行 RT-PCR，RT-PCR 反應(yīng)參數(shù)為:

過程	溫度	時間
逆轉(zhuǎn)錄	42℃	60 分鐘
預(yù)變性	95℃	5 分鐘
PCR 反應(yīng) （35 個循環(huán)）	95℃	30 秒
	55℃	30 秒
	72℃	30 秒
延伸	72℃	5 分鐘

 

5.瓊脂糖電泳檢測擴增效果，陽性樣品預(yù)期得到的擴增產(chǎn)物長度為 192bp。如果陰性對照有此擴增產(chǎn)物或陽性對照無此擴增產(chǎn)物，則說明實驗失敗，需要分析實驗失敗的原因。只有在陰性對照沒有此擴增產(chǎn)物、陽性對照有此擴增產(chǎn)物的情況下，才有必要分析樣品的實驗結(jié)果，如果有此擴增產(chǎn)物則為陽性，如果無則為陰性。

關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 甲型肝炎病毒可視化 RT-LAMP 檢測試劑盒
本產(chǎn)品只能用于科研，不能用于臨床。