實驗方法原理

SP（streptavidin-perosidase）法，即鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法。SP法是常使用的方法。

試劑、試劑盒 二甲苯酒精PBS雙氧水枸櫞酸緩沖液羊血清工作液辣根過氧化物酶鏈霉素卵白素蘇木素DAB

儀器、耗材 冰箱顯微鏡燒杯玻璃缸

實驗步驟

1.  烤片：68℃，20 min。

 

2.  常規(guī)二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水：二甲苯I 20 min⇒二甲苯II 20 min⇒00%酒精10 min⇒100%酒精10 min⇒95%酒精5 min⇒80%酒精5 min⇒70%酒精5 min。

 

3.  阻斷滅活內(nèi)源性過氧化物酶：3%H2O2 37℃孵育10 min，PBS沖洗3X5 min。

 

4.  抗原修復(fù)：置0.01 M枸櫞酸緩沖液（PH6.0）中用煮沸（95℃，15-20 min），自然冷卻20 min以上，再用冷水沖洗缸子，加快冷卻至室溫，PBS沖洗3X5 min。

 

5.  正常羊血清工作液封閉，37℃10 min，傾去勿洗。

 

6.  滴加一抗4℃冰箱孵育過夜，PBS沖洗3X5 min（用PBS緩沖液代替一抗作陰性對照）；滴加生物素標記二抗，37℃孵育30 min，PBS沖洗3X5 min。

 

7.  滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉素卵白素工作液，37℃孵育30 min，PBS沖洗3X5 min。

 

8.  DAB/H2O2反應(yīng)染色，自來水充分沖洗后，蘇木素復(fù)染，常規(guī)脫水，透明，干燥，封片。