上海雅吉生物科技有限公司教您分析HPLC常見峰形及異常情況 
一、HPLC

全稱液相色譜（High Performance Liquid Chromatography），是一種快速的分離分析技術(shù)。HPLC具有、高速、高靈敏度、適用范圍廣和流動(dòng)相選擇范圍廣等特點(diǎn)，因而發(fā)展迅速，并在醫(yī)藥、食品、化妝品和農(nóng)藥等很多行業(yè)有著廣泛的應(yīng)用。

二、HPLC峰形

HPLC分析過程中，由于各種原因，經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一些異常峰形，嚴(yán)重影響對(duì)結(jié)果的分析，給實(shí)驗(yàn)人員帶來很大的困擾。下面介紹一些常見的峰形以及可能的原因：

1. 未出峰

可能的原因：

a.       未成功進(jìn)樣，或樣品未溶解進(jìn)溶劑中，或樣品分解變質(zhì)或樣品濃度太低；

b.      儀器本身的問題：泵或者檢測器故障；

c.       流動(dòng)相選擇不合適，如對(duì)于反相硅膠柱來說，若流動(dòng)相極性太大，是沖不下來一些小極性的物質(zhì)的，物質(zhì)一直保留在柱子中，因而不出峰。

d.      檢測器不合適，如：有些產(chǎn)品沒有紫外吸收或者吸收很弱，但是檢測還使用了UV檢測器

2.平頭峰

可能的原因：

a.  樣品濃度過大或進(jìn)樣體積太大，這個(gè)也是大多數(shù)原因

 

 

b. 檢測器設(shè)置不正確

 

可能的原因：

a.       流動(dòng)相吸收本底值過高

b.      進(jìn)樣過程中進(jìn)入空氣

c.       樣品組分的吸收低于流動(dòng)相

d.      配制樣品的溶劑與流動(dòng)相不一致

4.肩峰

 

可能的原因：

a.       進(jìn)樣量過大；樣品濃度過高

b.      保護(hù)柱或色譜柱柱頭堵塞

c.       保護(hù)拄或色譜柱污染或失效

d.      色譜柱柱頭塌陷

5.裂峰

 

可能的原因：

a. 溶劑效應(yīng)：溶解樣品用的溶劑和起始流動(dòng)相極性相差太大

b. 保護(hù)柱或色譜柱柱頭堵塞

c. 保護(hù)拄或色譜柱污染或失效

d. 色譜柱柱頭塌陷

 

6.鬼峰

鬼峰（ghost peak）是在某個(gè)譜圖里出現(xiàn)，可能同樣的條件再做一次又不出現(xiàn)了，時(shí)有時(shí)無的峰。

可能的原因：

a. 進(jìn)樣閥殘余峰，在每次進(jìn)完樣后用充足的時(shí)間來平衡和清洗系統(tǒng)

b. 樣品中存在未知物，改進(jìn)樣品的預(yù)處理

c. 流動(dòng)相污染，更換新流動(dòng)相（或者換品牌）；盡可能現(xiàn)配現(xiàn)用，隔夜的流動(dòng)相再次使用時(shí)要過濾

d. 流路中有小的氣泡，打開Purge閥，加大流速排除

7. 前伸峰

 

可能的原因：

a. 進(jìn)樣量或樣品濃度高

b. 溶解樣品的溶劑比流動(dòng)相極性強(qiáng)

c. 保護(hù)拄或色譜柱污染或失效

d. 流動(dòng)相不合適，更換新流動(dòng)相（調(diào)pH或換種類、比例等）

8. 拖尾峰

 

 

可能的原因：

a. 進(jìn)樣量或樣品濃度高

b. 流動(dòng)相不合適，更換新流動(dòng)相（調(diào)pH或換種類、比例等）

c. 硅羥基作用：加入三乙胺，用堿致鈍化柱增加緩沖液或鹽的濃度降低流動(dòng)相pH值，鈍化樣品

d. 柱內(nèi)燒結(jié)不銹鋼失效：更換燒結(jié)不銹鋼，加在線過濾器，過濾樣品

e. 色譜柱柱頭塌陷或柱效下降：更換色譜柱

 

注：除以上異常峰形外，HPLC檢測過程中，還有很多其它情況，小伙伴們可以從儀器本身、流動(dòng)相、固定相（色譜柱）、柱溫和等度與梯度方法學(xué)等方面，調(diào)整參數(shù)，終找到一種合適的HPLC方法。