小鼠心肌細胞HL-1熒光鑒定報告

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一、實驗器材及試劑

1、實驗器材

載玻片及蓋玻片 江蘇世泰實驗器材有限公司

顯微鏡 奧林巴斯 BX53 熒光顯微鏡

2、主要實驗試劑

試劑 廠家 貨號

多聚甲醛 國藥集團 80096618

濃縮型正常山羊血清（封閉） 武漢博士德生物工程有限公司 AR1009

熒光（Cy3）標記羊抗小鼠 IgG 武漢博士德生物工程有限公司 BA1031

TritonX-100 碧云天 ST795

DAPI 碧云天 C1002

抗熒光淬滅封片劑 SouthernBiotech 0100-01

α-Sarcomeric actin（種屬:小鼠） 武漢博士德生物工程有限公司 BM0001

二、細胞爬片免疫熒光實驗步驟

一天：

1. 在培養(yǎng)板中將已爬好細胞的玻片用 PBS 浸洗 3 次，每次 3min；

2. 用 4%的多聚甲醛固定爬片 15min，PBS 浸洗玻片 3 次，每次 3min；

3. 0.5% TritonX-100（PBS 配制）室溫通透 20min；

4. PBS 浸洗玻片 3 次，每次 3min，吸水紙吸干 PBS，在玻片上滴加正常山羊血清，室溫

封閉 30min；

5. 吸水紙吸掉封閉液，不洗，每張玻片滴加足夠量的稀釋好的一抗（α-Sarcomeric actin）

并放入濕盒，4℃孵育過夜；

第二天：

6. 加熒光二抗：PBST 浸洗爬片 3 次，每次 3min，吸水紙吸干爬片上多余液體后滴加稀釋好

的熒光（Cy3）標記羊抗小鼠 IgG，濕盒中 20-37℃孵育 1h，PBST 浸洗切片 3 次，每

次 3min；注意：從加熒光二抗起，后面所有操作步驟都盡量在較暗處進行。

7. 復染核：滴加DAPI 避光孵育 5min，對標本進行染核，PBST5min×4 次洗去多余的 DAPI；

8. 用吸水紙吸干爬片上的液體，用含抗熒光淬滅劑的封片液封片，然后在熒光顯微鏡下觀

察采集圖像。

一抗稀釋比：

熒光二抗稀釋比：

熒光（Cy3）標記羊抗小鼠 IgG 1：100

α-Sarcomeric actin（種屬：小鼠） 1：100三、實驗結(jié)果：

1、α-SCA（200X）：圖中紅色熒光為 α-SCA 陽性，陽性率＞90%，即：細胞純度＞90%

2、α-SCA（400X）：圖中紅色熒光為 α-SCA 陽性，陽性率＞90%，即：細胞純度＞90%
 小鼠心肌細胞HL-1熒光鑒定報告