細胞培養(yǎng)是實驗室里常見和基本的實驗，但卻不是簡單的。

  如果細胞培養(yǎng)狀態(tài)不好，下一步實驗根本就沒辦法繼續(xù)。

 

  培養(yǎng)細胞怕的就是細胞出現(xiàn)污染，發(fā)現(xiàn)的早還能清洗一下，加大雙抗的用量，換個培養(yǎng)基垂死掙扎一下，發(fā)現(xiàn)的晚，細胞基本都飄了，這個時候已經(jīng)無力回天。

 

  細胞污染分為：

  1.物理污染

  2.化學污染

  3.生物污染

 

  物理污染主要是源于紫外線，溫度等物理因素影響。

  減少物理污染的方式有：使用質量好的培養(yǎng)箱、保持培養(yǎng)箱不斷電，定期維護培養(yǎng)箱等等。這樣可以將物理污染控制到一個比較小影響的范圍。

 

  化學污染主要是培養(yǎng)器皿的清潔不到位造成的一些洗滌劑的殘留，影響細胞的生長。減少化學污染我們平時需要對器皿清洗流程多加注意。首先用去污粉或洗滌劑擦洗；再用自來水沖洗；后用蒸餾水潤洗2～3次，即稱“一擦、二洗、三潤”。玻璃儀器洗潔凈的標志是器壁上附著的水不聚成水滴也不成股流下。

 

  生物污染主要是一些微生物的污染，分為細菌污染、真菌污染和支原體污染。

 

  細菌污染多數(shù)情況下培養(yǎng)液會出現(xiàn)：短時間內變黃、明顯渾濁現(xiàn)象。

  倒置顯微鏡下觀察，可見細胞表面及周圍有大量細菌存在，細胞停止生長并可能作為細菌的營養(yǎng)物被“吃掉”。

  處理方法：在細菌污染早期建議首先使用PBS清洗，加大抗生素的使用量（5倍），處理0.5-2小時，再消化處理，重新?lián)Q一個新的培養(yǎng)皿。

  但一般只在細菌污染早期有效，污染后期還是建議直接扔掉，避免污染其他細胞。

 

  真菌污染后一般會在培養(yǎng)液中形成淡黃色或是白色的成團絮狀物，一般肉眼可見，搖晃一下培養(yǎng)基，會隨著培養(yǎng)基一起浮動，倒置顯微鏡下可以看見細胞之間有縱橫交錯穿行的絲狀菌絲。

  處理方法：首先使用PBS多沖洗幾次，加大抗生素的使用量（1倍），處理0.5-2小時，更換新鮮培養(yǎng)基，連續(xù)處理2－3天。但抗生素對細胞生長影響也很大，如果持續(xù)有霉菌長出來建議直接扔掉，不然后期的細胞也會達不到實驗的質量。孢子可通過空氣散布，好重新消毒培養(yǎng)箱，污染的細胞單獨存放，操作時酒精擦手。

 

  支原體是一種類似細菌但不具有細胞壁的原核微生物，是目前發(fā)現(xiàn)的小的簡單的原核生物，能在無生命的人工培養(yǎng)基上生長繁殖。支原體形態(tài)多變，在支原體污染較小的時候對細胞生長影響不是很明顯，但如果越來越嚴重將會導致細胞增殖緩慢。甚至從培養(yǎng)器皿脫落。

  確認是否有支原體可以做基因診斷:利用DNA探針對支原體診斷其敏感性稍差，但特異性高;用聚合酶鏈反應(PCR)，敏感性、特異性均高。

  清除支原體的方法一般可以使用支原體清除劑，但目前的清除劑并不能達到*清除支原體的效果，只能抑制到一個支原體影響較小的狀態(tài)。

 

  有時候細胞背景很干凈無明顯污染物，但又確實狀態(tài)不好，那就需要從操作上來找原因了，一般細胞還是比較好養(yǎng)普通的消化傳代操作就能維持細胞一個很好的狀態(tài)，但也有一些細胞需要特別注意一下。

 

  舉個例子！

  正常的MCF10A是一個上皮樣細胞，形態(tài)比較規(guī)則，但一旦消化過度，他就會大量死亡。

  一般新手在消化細胞的時候需要在顯微鏡下多觀察，不像養(yǎng)細胞非常有經(jīng)驗的人，對每一個細胞的生長特性都非常了解。顯微鏡下觀察到細胞有回縮的狀況就可以用胰酶輕輕將細胞吹下來終止消化了。

  正常的J774A.1S是處于一個圓形的狀態(tài)，但如果消化操作不當，它的形態(tài)就會發(fā)生變化呈梭形。

  為什么會出現(xiàn)這樣的狀況呢？

  主要是因為J774A.1容易貼壁，如果你在消化傳代的時候直接在皿里面終止消化，它很快又會重新貼到皿底，你需要將胰酶消化后的細胞混合液一起加到含培養(yǎng)基的離心管里面終止消化，離心，重懸再鋪板，操作過程要迅速。

  以上就是關于如何養(yǎng)好細胞，給出的一些解決辦法，希望對大家在細胞培養(yǎng)方面能起到幫助。