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4%多聚甲醛固定微生物樣品的原理
閱讀:4550 發(fā)布時間:2020-8-31標本中大多數(shù)神經(jīng)激素、肽類物質(zhì),以及蛋白質(zhì)為水溶性,在用于研究之前,常需固定, 即使其凝固以降低其水溶性。甲醛能與蛋白質(zhì)的氨基反應(yīng),使蛋白質(zhì)凝固,因此在醫(yī)藥上可做為檢驗時的組織固定劑、以及防腐劑等。在固定劑中,用的是多聚甲醛。
常用固定液:固定劑品種很多,但大多屬于醛類和醇類。其固定原理不同,各有優(yōu)缺點。
醛類(常用甲醛、戊二醛和多聚甲醛)
醇類(常用乙醇)
其它 (丙酮)
(1) 醛類
甲醛(福爾馬林)應(yīng)用廣
原理:形成分子間的交聯(lián),影響蛋白構(gòu)型而使之固定。 優(yōu)點:形態(tài)結(jié)構(gòu)保存好,且穿透性強,組織收縮少。 缺點:
甲醛放置過久可氧化為甲酸,使溶液pH降低,影響染色;
醛基與抗原蛋白的氨基交聯(lián)形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構(gòu)象出現(xiàn)空間障礙;
分子間交聯(lián)形成的網(wǎng)格結(jié)構(gòu)可能部分或*掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露。可造成假陰性的染色結(jié)果。 注意事項:
縮短固定時間,降低固定溫度(4°C),為此組織塊不宜過厚。
改用中性緩沖福爾馬林,以pH值7.2~7.4 0.01mol/L的磷酸鹽緩沖液配制成10%甲醛固定液,減少固定液pH的變化。
固定后充分水洗以減少分子間交聯(lián)。
切片在作免疫組化染色前,先經(jīng)預(yù)處理使抗原再現(xiàn)(抗原修復(fù))。
戊二醛:
穿透性強,微細結(jié)構(gòu)保存好,但對抗原有一定影響,常與其他固定劑聯(lián)合用作免疫電鏡固定液。
多聚甲醛(常用4%):
可用于免疫電鏡;也可用于免疫熒光染色。
主要檢測組織內(nèi)一些性能嬌弱的抗原特別是細胞表面抗原,例如各類淋巴細胸分化決定簇(CD)、主要組織相容性抗原等。
(2) 醇類
用的醇類固定劑是乙醇。
其固定作用:使細胞內(nèi)蛋白、糖類發(fā)生沉淀。 優(yōu)點:穿透性強、抗原性保存好。 缺點:
脫水性強,易引起組織收縮、變硬,影響切片質(zhì)量,因而乙醇固定時間不宜過長(2h內(nèi))。 乙醇使蛋白變性的作用輕,固定后可再溶解;染色過程中,溫育時間長,抗原可流失而減弱反應(yīng)強度
3) 其它固定劑 丙酮:
對抗原性的保存好,但脫水性更強,較少用于組織標本,但細胞爬片常用丙酮固定。