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技術(shù)文章

如何看流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果中的圖

閱讀:997          發(fā)布時間:2020-9-22



Q1:坐標(biāo)軸的意義?

1、  單參數(shù)直方圖

每一個細(xì)胞單參數(shù)的測量數(shù)據(jù)可以整理成統(tǒng)計分布,以直方圖的方式來顯示。在圖中,橫坐標(biāo)表示熒光信號或散射光信號相對強度的值,其單位是道數(shù)(channel),可以是線形(line)或者對數(shù)(log)??v坐標(biāo)一般是相對細(xì)胞/粒子數(shù)(count)!
 



2、  二維圖

在二維圖的中,橫坐標(biāo)/縱坐標(biāo)都表示熒光信號或散射光信號相對強度的值,可以是線形(line)或者對數(shù)(log)。雙參數(shù)圖可以將樣品細(xì)胞群分開,從而方便對感興趣的細(xì)胞進(jìn)行分析。



Q2:“Gate”和 “Regin”?

設(shè)門是流式細(xì)胞分析中一種重要的技術(shù),只有通過佳的設(shè)門方式,才能準(zhǔn)確地獲取和分析數(shù)據(jù),從而得到臨床診斷和科研中有價值的信息。

On-line gating(threshold gating)監(jiān)測/獲取數(shù)據(jù)
Off-line gating: 分析實驗數(shù)據(jù)          散射光設(shè)門/熒光設(shè)門          散射光/熒光聯(lián)合設(shè)門         

多重邏輯門(組合門)多重邏輯門 G3=R1 and R2 (G3=R1×R2)

其它: G=R1 or R2 G=R1 not R2Q3:流式圖中的顏色與熒光顏色?
 

流式圖中的顏色為區(qū)分不同細(xì)胞群而人為, 與熒光顏色無關(guān)!!

Q4:流式圖中的陰/陽(N/P)如何劃分?

如何做M1陰性界限?實際上,這個M1的劃分*是根據(jù)陰性(同型)對照來的!如下圖:左圖為同型對照,即:您所檢測的物質(zhì)在陰性組中的基礎(chǔ)表達(dá)量,可以理解為背景、靜息狀態(tài)下、基礎(chǔ)水平、未受刺激時等。右圖即陽性組,也就是接受刺激后,功能狀態(tài)下、藥物作用后等。

Q5:  這么巧,陰性正好在101劃分??

其實, 我們可以人為地將電壓,放大倍數(shù)調(diào)到相應(yīng)的大小,使陰性的右邊界在某一個值上,(通常劃在101附近)這樣后期做sample時好看!當(dāng)然也可以調(diào)到102,103次方。

Q6:為什么要進(jìn)行熒光補償?

流式細(xì)胞分析中經(jīng)常要用到2種以上的熒光標(biāo)記抗體進(jìn)行染色,而目前所使用的多種熒光染料發(fā)射譜間有一定重疊。

“熒光補償”這個術(shù)語是指修正熒光滲漏的過程,如從探測器除去除匹配熒光以外的任何熒光信號。

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