組織及血液酸性磷酸酶（ACP）活性測(cè)定試劑盒說明書
微量法
注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
ACP在酸性條件下催化磷酸單酯水解稱無機(jī)磷酸，常見于巨噬細(xì)胞的溶酶體內(nèi)。ACP常用于
前列腺癌的輔助診斷。
測(cè)定原理：
在酸性環(huán)境中，ACP催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚，苯酚與4-氨基安替和鐵青化鉀反應(yīng)生
成紅色亞醌衍生物，在510nm有特征光吸收；通過測(cè)定510nm吸光度增加速率，來計(jì)算ACP活性。
自備儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器
和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體×1 瓶，4℃避光保存。
試劑三：液體×1 瓶，4℃避光保存。
試劑四：液體×1 瓶，4℃避光保存，變成藍(lán)綠色不能使用。
標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1 支，2μmol/mL 酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。
粗酶液提?。?br />1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加
入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，4℃、8000g 離心10min，取上清液待測(cè)。
2. 血液可直接測(cè)定，或者適當(dāng)稀釋后測(cè)定。
測(cè)定：
1.分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到510nm ,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二置于37℃水浴中預(yù)熱30min。
3. 空白管：取EP管，加入4μL蒸餾水，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保
溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A空白管。
4. 標(biāo)準(zhǔn)管：取EP管，加入4μL標(biāo)準(zhǔn)品，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保
溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm 測(cè)定吸光度，記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
5. 對(duì)照管：取EP管，加入40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保溫15min；加入
試劑四120μL，混勻；后加入4μL上清液，混勻后于510nm測(cè)定吸光度，記為A對(duì)照管。
6. 測(cè)定管：取EP管，加入4μL上清液，40μL試劑二，40μL試劑三，混勻后置于37℃水浴中保
溫15min；加入試劑四120μL，混勻后于510nm 測(cè)定吸光度，記為A測(cè)定管。
注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需做一次。
ACP 活性計(jì)算：
a.使用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
1. 血液中ACP活性計(jì)算
活性單位定義：37℃中每毫升血液每分鐘催化產(chǎn)生1μmol酚定義為1個(gè)酶活單位。
ACP活力(μmol/min/mL)= [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)×V反總] ÷V樣
×V 樣總÷T= 6.8×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)
2. 組織中ACP活性計(jì)算
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μmol酚定義為1個(gè)酶活單位。
ACP(μmol/min/mg prot)= [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×V 反總]
÷(Cpr×V 樣)÷T=6.8×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管) ÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1μmol酚定義為1個(gè)酶活單位。
ACP (μmol/min/g)= [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×V 反總]÷(W×
V 樣÷V 樣總)÷T= 6.8×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管) ÷W
C 標(biāo)準(zhǔn)品：2μmol/mL；V 反總：反應(yīng)體系總體積（mL），205μL=0.205 mL；Cpr：上清液蛋
白質(zhì)濃度，mg/mL；W ：樣品質(zhì)量； V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積（mL），0.005mL；V 樣
總：提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間（min），15 min。
b.使用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
1. 血液中ACP活性計(jì)算
活性單位定義：37℃中每毫升血液每分鐘催化產(chǎn)生1μmol酚定義為1個(gè)酶活單位。
ACP活力(μmol/min/mL)= [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A測(cè)定管-A對(duì)照管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)×V反總] ÷V樣
×V 樣總÷T= 6.8×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)
2. 組織中ACP活性計(jì)算
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
活性單位定義：37℃中每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生1μmol 酚定義為1個(gè)酶活單位。
ACP(μmol/min/mg prot)= [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×V 反總]
÷(Cpr×V 樣)÷T=6.8×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管) ÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
活性單位定義：37℃中每克組織每分鐘催化產(chǎn)生1μmol酚定義為1個(gè)酶活單位。
ACP (μmol/min/g)= [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)×V 反總]÷(W×
V 樣÷V 樣總)÷T= 6.8×(A 測(cè)定管-A 對(duì)照管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管) ÷W
C 標(biāo)準(zhǔn)品：2μmol/mL；V 反總：反應(yīng)體系總體積（mL），205μL=0.205 mL；Cpr：上清液蛋
白質(zhì)濃度，mg/mL；W ：樣品質(zhì)量； V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積（mL），0.005mL；V 樣
總：提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間（min），15 min。
注意事項(xiàng)：
1、試劑二、試劑三和試劑四均需避光保存。
2、試劑四變藍(lán)綠色后不能再使用。
3、加入試劑四后必須立即混勻，否則顯色不*。
4、ACP不穩(wěn)定，尤其在37℃和pH大于7的條件下活力喪失快，因此酸性磷酸酶樣品一般需當(dāng)天
準(zhǔn)備；血清樣品中，每毫升血清中加入10mg檸檬酸氫二鈉或者5mg硫酸氫鈉，使pH降至6.5
以下，或5ml血清加入30%醋酸溶液2～3滴，置于4℃可保存1周。