測定意義 

UDPG 焦磷酸化酶是生物體糖原合成過程中的關(guān)鍵酶。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活 化，將 1-磷酸葡萄糖與 UTP 分子合成為 UDP-葡萄糖（UDPG）。 

測定原理 

UGP 可逆催化反應(yīng)生成 1 磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖變位酶和 6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下 將 NADP 轉(zhuǎn)化為 NADPH，340nm 的吸光值增加速率反映了 UGP 活性。

 

尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UDP-glucose

pyrophosphosphprylase，UGP）試劑盒說明書

 微量法 100T/96S

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義

UDPG 焦磷酸化酶是生物體糖原合成過程中的關(guān)鍵酶。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活

化，將 1-磷酸葡萄糖與 UTP 分子合成為 UDP-葡萄糖（UDPG）。

測定原理

UGP 可逆催化反應(yīng)生成 1 磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖變位酶和 6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下

將 NADP 轉(zhuǎn)化為 NADPH，340nm 的吸光值增加速率反映了 UGP 活性。

自備實驗用品及儀器

天平、低溫離心機(jī)、研缽、紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板。

試劑組成和配制

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存。臨用前加 2mL 蒸餾水充分溶解。

試劑三：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存。臨用前加 2mL 蒸餾水充分溶解。

試劑四：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存。臨用前加 2mL 蒸餾水充分溶解。

試劑五：液體 2mL×1 瓶，4℃保存。

酶液提取

1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1mL

提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于 4℃，10000g 離心 10min，取上清置冰上待測。

2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500

萬細(xì)胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，

總時間 3min）；然后 4℃，10000g 離心 10min，取上清置冰上待測。

3. 液體：直接檢測。

測定操作

1. 紫外分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 取 1mL 石英比色皿，依次加入 100μL 試劑一，20μL 試劑二，20μL 試劑三，20μL 試劑

四，20μL 試劑五，20μL 粗酶液，充分混勻，記錄 340nm 處 30s 的吸光值 A1 和 330s 的

吸光值 A2，△A=A2-A1

計算公式

a. 使用微量石英比色皿測定的計算公式如下

（1）按照樣本蛋白濃度計算

酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。

UGP（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計算

酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。

UGP（nmol/min /g）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=321.54×ΔA÷W

（3）按照細(xì)胞數(shù)量計算

酶活單位定義：每 104 個細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。

UGP（U/104

cell）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣×細(xì)胞數(shù)量÷V 樣總) ÷T

=321.54×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量

（4）按照液體體積計算

酶活單位定義：每毫升液體每分鐘消耗 1 nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。

UGP（nmol/min /mL）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總÷V 樣÷T=321.54×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103

L / mol /cm；d：比

色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.02mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；T：反

應(yīng)時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g

b.使用 96 孔板測定的計算公式如下

（1）按照樣本蛋白濃度計算

酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。

UGP（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣×Cpr) ÷T=643.08×ΔA÷Cpr

（2）按照樣本質(zhì)量計算

酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。

UGP（nmol/min /g）＝ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=643.08×ΔA÷W

（3）按照細(xì)胞數(shù)量計算

酶活單位定義：每 104 個細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。

UGP（nmol/min /104

cell）= ΔA÷（ε×d）×V 反總÷(V 樣×細(xì)胞數(shù)量÷V 樣總) ÷T

=643.08×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量

（4）按照液體體積計算

酶活單位定義：每毫升液體每分鐘消耗 1 nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。

UGP（nmol/min /mL）=ΔA÷（ε×d）×V 反總÷V 樣÷T=643.08×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103

L / mol /cm；d：比

色皿光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.02mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；T：

反應(yīng)時間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g

注意事項

配制好的試劑二、試劑三、試劑四 3 天內(nèi)使用完。