產(chǎn)品及特點(diǎn)

本產(chǎn)品是高效 cDNA 合成和 PCR 擴(kuò)增的一步法 RT-PCR 試劑盒，用于以RNA 為模板，通過(guò)特異引物合成 cDNA 之后，在 DNA 聚合酶的作用下通過(guò) PCR 技術(shù)檢測(cè)目標(biāo)基因的含量。本產(chǎn)品特點(diǎn)如下：

• 實(shí)現(xiàn)一管式完成 RT-PCR 反應(yīng)，避免樣品交叉污染。
• 反應(yīng)產(chǎn)物加入 Loading Buffer 后可以直接電泳檢測(cè)。
• 本產(chǎn)品包含了 cDNA 合成以及 PCR 反應(yīng)所必須的酶和反應(yīng)體系， 優(yōu)化的Buffer 體系減少了反轉(zhuǎn)錄酶對(duì)擴(kuò)增反應(yīng)的抑制，提高了反應(yīng)整體的敏感性。
• 本試劑盒足夠 50 次 20μL 體系的 RT-PCR，只能用于科研目的。

規(guī)格及成分

成 份

編 號(hào)

十孔盒包裝

一步式 RT-PCR Mix，5×

130609a

75 μL

RT Buffer，5 ×

130609b

200 μL

DEPC-ddH2O

80403-1

1 mL

使用手冊(cè)

130609sc

1 份

運(yùn)輸及保存

低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期一年。

自備試劑

1.

2.

RNA 模板

自備引物。

使用方法

一、樣品 RNA 的制備

1. 用自選方法純化樣品的 RNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù) RNA 提取試劑盒兼容。也可以選購(gòu)本公司的 RNAout 系列產(chǎn)品。

二、設(shè)置一管式 RT-PCR 反應(yīng)（20 μL 體系）

2. 在 N+1 個(gè)干凈的無(wú) RNase 的 PCR 管中（N=樣品數(shù)，另外一個(gè)是陰性對(duì)照。用戶可以設(shè)置其他對(duì)照，樣品數(shù)需相應(yīng)增加），按下表加入各成分：

3. 輕柔混合均勻后放入 PCR 儀中進(jìn)行 RT-PCR。

4. 設(shè)定 RT-PCR 反應(yīng)條件時(shí)，一般將 RT 的條件設(shè)定成 50℃ 30 min，后接 94℃預(yù)變性 2 min，94℃變性 30 sec，退火 50-60℃  30 sec，延伸  72℃  1 kb/min，

后 3 步重復(fù) 30-40 個(gè)循環(huán)。終延伸 72℃ 5-10 min。

注意事項(xiàng)

1. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中請(qǐng)注意避免 RNase 污染。

2. 除酶以外的各種試劑，使用之前請(qǐng)*溶解并充分混勻，以防因鹽離子濃度不均影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

3. RNA 模板的完整性對(duì) cDNA 合成效率起著決定性作用，因此請(qǐng)選擇可靠的 RNA 提取/純化方法。

4. 如果擴(kuò)增片段較長(zhǎng)或者 RNA 結(jié)構(gòu)復(fù)雜，可以將 RNA 單獨(dú)置于 65-70℃加熱

5-10 min 后再加入體系。