植物總酚（Total Phenols，TP）試劑盒說明書

 微量法 100T/48S

注意：正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

測(cè)定意義：

植物酚類物質(zhì)具有清除自由基，抗氧化抗衰老的作用，具有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和醫(yī)療保健作用

而廣泛應(yīng)用于化妝品、食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域。

測(cè)定原理：

在堿性條件下，酚類物質(zhì)將鎢鉬酸還原，產(chǎn)生藍(lán)色化合物，在 760nm 處有特征吸收峰，測(cè)

760nm 處的吸光值，即可得樣品總酚含量。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：

天平、烘箱、粉碎儀、篩子、超聲破碎儀、60%乙醇、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、

微量石英比色皿/96 孔板、蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：60%乙醇，自備。

試劑一：液體 3mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。

總酚提?。?/span>

將樣本烘干至恒重，粉碎，過 40 目篩之后，稱取約 0.1g，加入 2.5mL 提取液，用超聲提取

法進(jìn)行提取，超聲功率 300W，破碎 5s，間歇 8s，60℃，提取 30min。10000g，25℃，離心

10min，取上清，用提取液定容至 2.5mL，待測(cè)。

測(cè)定操作表：

1、 分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 760nm，蒸餾水調(diào)零。

2、操作表

對(duì)照管 測(cè)定管

樣本待測(cè)液（µL） 10 10

試劑一（µL） 50

混勻，25℃靜置 2min

試劑二（µL） 50 50

H2O（µL） 140 90

混勻，25℃靜置 10 min，于微量石英比色皿/96 孔板中，測(cè)定 760nm 吸光值，ΔA=A 測(cè)定-A

對(duì)照。

總酚含量計(jì)算公式：

a. 用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 5.615x+0.0012，R

2 = 0.9994

總酚含量（mg/g）=（ΔA-0.0012 ）÷5.615×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）

 = 8.93×（ΔA–0.0012 ）÷W

V 樣總：加入提取液體積，2.5 mL； V 反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，

0.01mL；W：樣品質(zhì)量，g。

b.用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 2.808x+0.0012，R

2 = 0.9994

總酚含量（mg/g）=（ΔA-0.0012 ）÷2.808×V 反總÷（V 樣÷V 樣總×W）

 = 17.86×（ΔA–0.0012 ）÷W

V 樣總：加入提取液體積，2.5 mL； V 反總：反應(yīng)總體積，0.2mL；V 樣：反應(yīng)中樣品體積，

0.01mL；W：樣品質(zhì)量，g。

注意事項(xiàng)：

1. 吸光值大于 2，樣品適當(dāng)稀釋再測(cè)定，注意計(jì)算公式里乘以稀釋倍數(shù)。

2. 試劑一對(duì)皮膚有一定的刺激性，請(qǐng)操作時(shí)做好防護(hù)措施。

3. ，低檢出限為 2.4 μ g/g。